猪脑心肌炎病毒非结构蛋白3AB的原核表达及其单克隆抗体的研制

中国生物工程杂志

2008, Vol. 28

Issue (9): 27-31

研究报告

猪脑心肌炎病毒非结构蛋白3AB的原核表达及其单克隆抗体的研制

沈芳姜平教授

江苏省南京农业大学动物医学院江苏南京农业大学动物医学院预防兽医学

Expression of NSP 3AB gene of Encephalomyocarditis virus (EMCV) in E.coli and development of monoclonal antibodies against 3AB protein

全文: PDF(818 KB) HTML

摘要：

摘要　目的　利用原核表达系统表达猪脑心肌炎病毒 (EMCV) 非结构蛋白3AB，并通过杂交瘤细胞技术制备其单克隆抗体，为相关研究工作奠定基础。方法　利用大肠杆菌系统表达具有良好抗原性的重组3AB蛋白，经包涵体纯化后免疫BALB/ c 小鼠, 取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合, 间接ELISA筛选阳性的杂交瘤细胞, 并结合免疫荧光(IFA)和Weatern Blot对抗体的特异性进行鉴定。结果　经间接ELISA 筛选阳性的杂交瘤细胞, 获得1株能稳定分泌抗3AB蛋白抗体的杂交瘤细胞株，将其命名为2D12，其亚类测定为IgG1 /κ。Western Blot和间接免疫荧光试验证明该单抗能特异性识别3AB蛋白。结论　成功获得了针对EMCV-3AB 的特异性单抗,为进一步研究猪脑心肌炎病毒非结构蛋白3AB的结构与功能及临床诊断试剂的研发奠定必要的物质基础。

关键词： 脑心肌炎病毒; 非结构蛋白; 原核表达; 单克隆抗体

Abstract:

Abstract Objective: To express the EMCV 3AB gene by prokaryotic expression systerm , and prepare monoclonal antibodies against it. Method: NSP 3AB gene of Encephalomyocarditis virus (EMCV) was amplified and cloned into a prokaryotic expression vector pGEX-6P-1 and a recombinant protein 3AB with high antigenicity was expressed in E. coli. Balb / c mice were immunized by purified recombinant 3AB protein of inclusion-body, and the splenocytes of the immunized mice were fused with murine myeloma cells to produce hybridoma cell line. Results: After subcloning by 3 times, one strain of hybridoma cell line steadily secreting antibodies of 3AB protein was obtained, named 2D12. The McAb belongs to IgG1 /κ. The McAb and was confirmed by indirect immunofluorescent assay (IFA) and Western-blotting. Conclusion: These results can provide a potential value for structural and functional studies of EMCV-3AB and early diagnosis of Encephalomyocarditis virus infection.

Key words: Encephalomyocarditis virus (EMCV) non-structural protein Prokaryotic expression Monoclonal antibody

收稿日期: 2008-03-28 出版日期: 2008-09-25

通讯作者: 姜平教授

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沈芳,姜平教授. 猪脑心肌炎病毒非结构蛋白3AB的原核表达及其单克隆抗体的研制[J]. 中国生物工程杂志, 2008, 28(9): 27-31.

. Expression of NSP 3AB gene of Encephalomyocarditis virus (EMCV) in E.coli and development of monoclonal antibodies against 3AB protein. China Biotechnology, 2008, 28(9): 27-31.

链接本文:

https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/ 或 https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/Y2008/V28/I9/27

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