Please wait a minute...

中国生物工程杂志

CHINA BIOTECHNOLOGY
中国生物工程杂志  2008, Vol. 28 Issue (4): 27-31    
研究报告     
口蹄疫病毒WFL株ORF基因真核表达质粒的构建及病毒的拯救
任林柱 王兴龙 崔丽瑾 张辉 孟柯音
军事医学科学院军事兽医研究所;吉林大学畜牧兽医学院 军事医学科学院军事兽医研究所 吉林大学畜牧兽医学院 吉林大学畜牧兽医学院 军事医学科学院军事兽医研究所
Rescue of FMDV from Contransfecting Full Length Infectious RNA of WFL Strain and Eukaryotic Expression Plasmid of FMDV ORF Gene
Ling-zhu Ren
 全文: PDF(665 KB)   HTML
摘要:

本研究构建FMDV WFL株ORF(open reading frame)基因真核表达质粒pEGFP-C1-A3I3,并进行了表达研究和共转染研究。结果发现,该质粒可以在BHK-21细胞中表达。将其与体外转录获得的FMDV RNA共转染BHK-21细胞后,用夹心ELISA、RT-PCR法以及电镜观察证明共转染后的细胞培养液中有病毒粒子,且病毒量高于单独转染RNA所得病毒量。证明用FMDV基因组真核表达质粒与其基因组体外转录RNA共转染敏感细胞可提高拯救病毒的数量。

关键词: 口蹄疫病毒开放性阅读框真核表达反向遗传技术拯救    
Abstract:

An eukaryotic expression plasmids pEGFP-C1-A3I3,with open reading frame(ORF) of FMDV WFL strain, was constructed based on the pEGFP-C1.The results of transient expression showed that the eukaryotic expression plasmids can be expressed in BHK-21.When cotransfected the plasmid with RNA transcribed from linearized cDNA clone,FMDV antigen and nucleotide acids was detected in cell culture fluid by sandwich ELISA and RT-PCR,respectively.And the virus particles were also found by electron microscope.The results proved that cotransfection of eukaryotic expression plasmid with RNA can improve virus rescuing.And for the first time we successfully rescued FMDV by cotransfecting eukaryotic expression plasmid with RNA transcribed in vitro.

Key words: foot-and-mouth disease virus    open reading frame(ORF)    eukaryotic expression    reverse genetics    rescue
收稿日期: 2007-11-16 出版日期: 2008-04-25
通讯作者: 王兴龙   
服务  
把本文推荐给朋友
加入引用管理器
E-mail Alert
RSS
作者相关文章  
王兴龙
张辉
孟柯音
崔丽瑾
任林柱

引用本文:

任林柱,王兴龙,崔丽瑾,张辉,孟柯音. 口蹄疫病毒WFL株ORF基因真核表达质粒的构建及病毒的拯救[J]. 中国生物工程杂志, 2008, 28(4): 27-31.

Ling-zhu Ren . Rescue of FMDV from Contransfecting Full Length Infectious RNA of WFL Strain and Eukaryotic Expression Plasmid of FMDV ORF Gene. China Biotechnology, 2008, 28(4): 27-31.

链接本文:

https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/        https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/Y2008/V28/I4/27

[1] 程旭,杨雨睛,吴赛男,侯勤龙,李咏梅,韩慧明. 金黄色葡萄球菌SarAIcaA及其融合基因的DNA疫苗构建及在小鼠免疫应答中的初步研究 *[J]. 中国生物工程杂志, 2020, 40(7): 41-50.
[2] 郎巧利,余琳,何麒麟,葛良鹏,杨希. 高效构建卵清白蛋白scFv噬菌体文库及其筛选 *[J]. 中国生物工程杂志, 2018, 38(11): 25-31.
[3] 王青, 徐彦召, 魏晓晓, 王秋霞, 杭柏林, 孙亚伟, 王飞飞, 胡建和. 猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5a多克隆抗血清的制备[J]. 中国生物工程杂志, 2015, 35(8): 38-43.
[4] 朱志坚, 连凯琪, 郑海学, 杨孝朴. 口蹄疫病毒入侵宿主细胞研究进展[J]. 中国生物工程杂志, 2015, 35(5): 103-108.
[5] 王金胜, 姜浩武, 张晋霞, 潘磊, 赵凤芝, 于云飞, 蔡亚雄, 邓宁. 抗FGF2人鼠嵌合抗体在HEK293T细胞中的表达优化[J]. 中国生物工程杂志, 2014, 34(5): 14-22.
[6] 庞敏, 王海龙, 郭民, 郭睿. 人ANKRD49基因真核表达载体的构建及其功能的初步研究和RNA干扰靶点的鉴定[J]. 中国生物工程杂志, 2014, 34(10): 15-21.
[7] 刘玉芬, 冬黎黎, 孙玉刚, 刘鹏, 陈辉, 赵文阁. 中介蝮蛇毒纤溶酶基因真核表达载体的构建及其功能的研究[J]. 中国生物工程杂志, 2012, 32(10): 1-6.
[8] 代鹏, 周广青, 林密, 冯霞, 马军武, 张晓霞. 利用核糖体展示技术筛选口蹄疫病毒 单链抗体基因[J]. 中国生物工程杂志, 2012, 32(07): 95-101.
[9] 徐文琦, 柴晓杰, 张婷, 代靖宇, 张晓琳. 胰蛋白酶抑制剂KSTI3基因新型真核表达载体的构建及其在盐藻中的表达[J]. 中国生物工程杂志, 2011, 31(8): 29-34.
[10] 杨双, 马军武, 周广青, 林密, 冯霞, 刘涛, 代鹏. 核糖体展示口蹄疫单链抗体库的构建[J]. 中国生物工程杂志, 2011, 31(7): 98-103.
[11] 方静, 周颖, 李智慧, 达飞, 胡要磊, 毛建平. 小鼠淋巴细胞抗原CTLA-4的胞外肽段表达及纯化[J]. 中国生物工程杂志, 2010, 30(11): 61-64.
[12] 王正茂 李琳 管文燕 李越希. 真核细胞表达单纯疱疹病毒I型包膜糖蛋白B及其抗原性与免疫原性分析[J]. 中国生物工程杂志, 2010, 30(06): 8-13.
[13] 吴坤 冯娟 姚伦广 楚素霞 阚云超. 拯救细胞系恢复重组家蚕核型多角体病毒包涵体实现外源蛋白在家蚕中产业化生产[J]. 中国生物工程杂志, 2010, 30(05): 96-102.
[14] 李永亮 卢曾军 杨苏珍 田美娜 谢宝霞 刘在新. 口蹄疫病毒非结构蛋白定量检测ELISA方法的建立[J]. 中国生物工程杂志, 2009, 29(11): 70-73.
[15] 任林柱,史利军. 狂犬病毒反向遗传学技术的研究及应用进展[J]. 中国生物工程杂志, 2009, 29(03): 89-93.