选择一段与COL1A1基因相应序列同源、适合于在大肠杆菌E.coli中表达、含有编码促细胞粘附位点GER三肽密码子的基因序列。利用RT-PCR技术自人组织扩增该序列，构建pET28a(+)-COL重组表达质粒并转化到大肠杆菌BL21(DE3)pLysS。IPTG诱导表达获得重组人源性胶原RHDC, 表达量达到菌体总蛋白的40%左右。SDS-PAGE和Western Blot结果推测该胶原具有三螺旋结构。细胞粘附试验证明RHDC具有促细胞粘附能力，具有应用在生物材料领域的潜力。
研究鸟氨酸脱羧酶抗酶蛋白对人红白血病K562细胞增殖、三氧化二砷（ As2O3）诱导凋亡时的影响。方法: 定点突变技术构建缺失frameshift位点的pEGFP-N1-AZ1-mutation重组表达载体。脂质体法转染K562细胞，通过G418筛选获得稳定表达antizyme1的K562pAZ1m细胞系。采用不同浓度的As2O3处理细胞，通过MTT法检测细胞增殖，流式细胞术分析细胞周期及凋亡变化。并通过RT-PCR方法检测antiyme1转染对cyclin D1和survivin基因表达的影响。结果：获得稳定表达antizyme1的K562-AZ1m细胞株后，其增殖能力明显减慢。CyclinD1基因表达降低，细胞主要停滞于G0/G1期。在 As2O3的诱导作用下，细胞凋亡增多，survivin基因表达降低。结论：AZ1基因能够抑制K562细胞增殖，通过对cyclinD1的负调控使细胞周期停滞于G0/G1期。并可能通过下调survivin表达来加强 As2O3对其的诱导凋亡作用
目的 应用RNA干扰技术抑制结肠癌血管内皮生长因子（VEGF）表达。方法 将VEGF基因作为RNA干扰的靶区，通过E-RNAi网上提供的服务，设计两个特异的RNA干扰序列，将其装入含U6启动子的载体上，构建成抗VEGF基因的小发夹样RNA（shRNA）表达载体，再转染人结肠癌细胞HT29，通过RT-PCR、Northern杂交、免疫荧光和Western杂交，观察VEGF表达受抑的程度。结果 成功构建了两种抗VEGF基因的shRNA表达载体，RT-PCR、Northern杂交、免疫荧光和Western杂交，均发现其能明显抑制HT29细胞VEGF基因的表达，抑制率分别达42%、88%、73%和82%。结论 针对VEGF基因的shRNA表达载体能够明显抑制结肠癌细胞VEGF基因的表达。
目的:明确在转基因小鼠体内，βLCR对β地中海贫血基因表达的影响。方法：将完整人β-IVSⅡ-654地中海贫血基因，与串连了人βLCR的β-IVSⅡ-654地中海贫血基因分别经显微注射法制作转基因小鼠；荧光定量RT-PCR法检测β-IVSⅡ-654地贫基因在转基因小鼠体内的表达；采用统计分析比较2类转基因鼠中外源基因的表达量。结果：成功建立2类整合了人β-IVSⅡ-654地贫基因的转基因小鼠模型。荧光定量RT-PCR分析结果表明，在整合了串连人βLCR的β-IVSⅡ-654地贫基因的小鼠体内，外源基因mRNA的表达量远高于仅整合β-IVSⅡ-654地贫基因的小鼠（统计分析P值 ）。结论：βLCR核心片段的存在可以使β-珠蛋白基因家族（包括β-地贫基因）在转基因小鼠体内获得高效表达的必要条件。
目的 对本室已筛选到的一株共表达O型口蹄疫病毒3C基因、P1-2A基因和猪白细胞介素18基因的重组鸡痘病毒rFPV-3C-P1-2A-IL-18进行免疫原性研究。方法 分别用重组鸡痘病毒rFPV-3C-P1-2A-IL-18、rFPV-P1-2A-3C和对照组282E4株FPV、PBS对小鼠进行免疫接种，并检测各免疫组的T 淋巴细胞亚类数量、CTL杀伤活性及抗体效价。结果 重组鸡痘病毒疫苗组免疫小鼠T 淋巴细胞亚类数量，CTL杀伤活性和抗体效价均显著高于对照组，且重组鸡痘病毒rFPV-3C-P1-2A-IL-18的小鼠T 淋巴细胞亚类数量和CTL特异性杀伤活性与rFPV-P1-2A-3C相比，差异显著。结论 本实验为开发新型FMDV疫苗奠定了实验免疫基础。
利用RT-PCR扩增出口蹄疫病毒小核糖体进入位点（IRES）序列，并定向克隆进pcDNA3.1(+)载体，构建成双顺反子真核表达载体。为了验证该载体是否能够转录出双顺反子mRNA，在IRES起始密码（ATG）下游正确插入增强型的绿色荧光蛋白基因（egfp），把重组质粒转染BHK-21细胞，培养20～48 h，在紫外显微镜下观察，能够看到典型的绿色荧光，表明载体能够体能够利用FMDV的IRES能够介导非帽依赖性表达外源基因。并通过流式细胞仪，与同样是CMV启动转录egfp的pGFPN1质粒在细胞中的表达的水平进行了比较。该载体的成功构建为体外表达双基因、双顺反子逆转录载体构建以及相关应用奠定基础，并有作为基因疫苗和标记定位基因治疗载体的潜力。
谷胱甘肽磷脂氢过氧化物酶是唯一能够直接还原生物膜上脂类过氧化物的过氧化物酶．本文利用圆二色光谱（CD）、内源荧光光谱和差示扫描量热仪（DSC）研究了温度对谷胱甘肽磷脂氢过氧化物酶（OsPHGPx）活性及其构象变化的影响．在温度为 20－27.5℃ 期间，随着温度的逐渐升高，OsPHGPx 的活性逐渐上升，到 27.5℃ 时达到最大值；在 27.5－45℃ 时，随着温度逐渐升高，其活性迅速下降；当温度超过45℃时，其活性完全尚失. 在20－40℃,CD 光谱、内源荧光光谱和 DSC 均没有发生明显变化，暗示OsPHGPx 的结构基本保持完整；在 40－55℃，CD 光谱显示该酶二级结构发生去折叠；内源荧光光谱的变化暗示该酶三级结构发生去折叠．其中在40－45℃，DSC显示该酶可能存在两个去折叠中间体．当温度超过 55℃ 时，整个酶的构象不再发生变化，呈现去折叠状态．
采用RT-PCR方法从小麦品种豫教2号的发育籽粒中克隆出淀粉合酶III基因（starch synthase III, SSIII）部分cDNA片段(509bp) (GenBank No. EF466009)，同源性比较结果显示，它与GenBank 上已报道的SSIII基因有高度同源性。以pWM101质粒为基础，构建了由35S启动子调控的SSIII基因的反义表达载体pWM101SSIII；另外，还以pFGC5941质粒为基础，构建了SSIII基因的RNAi干扰载体pFGC5941SSIII，这些载体的构建为研究此基因的功能打下了很好的基础。
融合PCR技术（fusion PCR）采用具有互补末端的引物，形成具有重叠链的PCR产物，通过PCR产物重叠链的延伸，从而将不同来源的任意DNA片段连接起来，此技术在不需要内切酶消化和连接酶处理的条件下实现DNA片段的体外连接，为同源重组片段的构建提供了快速简捷的途径。对原有的融合PCR技术进行改进，以三个同源重组线性DNA片段的构建为例，详细论述了改进的融合PCR技术的反应过程及技术体系。结果表明，改进的融合PCR技术可以同时进行三个片段及四个片段的融合反应，产物长度均在4.5kb以上，各同源重组片段在扩增过程中均无突变发生，获得的片段可以用于后续实验分析。
表面等离子体共振（surface plasmon resonance, SPR）生物传感器，作为一种适时快捷，无需标记的生物分子相互作用研究工具，已广泛应用于生物化学分析与研究。羧甲基化葡聚糖修饰的CM5传感芯片是Biacore 系列仪器应用最为普遍的核心部件，目前CM5芯片主要从法玛西亚公司购买,价格昂贵，且一旦共价交联的受体分子失活，就不能重复利用。阐述了一种简便、低成本、用于SPR生物传感器的葡聚糖修饰金膜芯片的再生方法及其表征和应用。用此方法再生的芯片能被循环伏安法和原子力显微镜很好地表征，并成功地用于抗前列腺特异性抗原(prostate-specific antigen，PSA)固定和PSA检测, 同时测定了PSA与其抗体之间的动力学和亲和常数。
病毒受体是病毒宿主范围和组织嗜性的一个决定因素。研究表明，四种整联蛋白αvβ1、αvβ3、αvβ6、αvβ8能够介导口蹄疫病毒感染偶蹄动物，且αvβ6是主要的口蹄疫病毒受体。本实验在首次从健康双峰驼肺组织中克隆到了β6亚基基因并进行了比较分析。结果显示，双峰驼β6基因的编码区含有2367个核苷酸，编码788个氨基酸残基，其中信号肽由26个氨基酸组成；胞外域由681个氨基酸组成，含有8个潜在的糖基化位点(NXT/NXS)和58个半胱氨酸（Cys）残基；跨膜区由29个氨基酸组成(708-736aa)；胞浆域由52个氨基酸组成，含有一个NPLY核心基序和一个潜在的糖基化位点(NVT)，该基因在GenBank中的登录号为EF613220。双峰驼β6基因与牛、猪、羊、人、小鼠、挪威大鼠β6基因的核苷酸序列同源性分别为91.1%、91.8%、90.6%、90.5%、83.7%、84.1%，推导的氨基酸序列同源性分别为94.3%、93.4%、93.4%、93.7%、88.7%、88.6%。偶蹄动物（双峰驼、牛、羊、猪）的β6基因同源性较高，在遗传进化树上同属于一个亚群，表明β6亚基可能与口蹄疫病毒的宿主范围有关。
对白地霉Y162液体发酵产脂肪酶的条件进行了优化。首先采用单因子实验筛选出最适碳源为橄榄油，氮源为黄豆粉和NH4Cl，无机盐为BaCl2和MgCl2。在此基础上，利用Plackett-Burman设计对影响产酶因素的效应进行评价，筛选出具有显著效应的橄榄油、BaCl2和NH4Cl三个最显著的因素。用最陡爬坡路径逼近最大产酶区域后，利用响应面中心组合设计对显著因素进行优化，得出橄榄油、BaCl2和NH4Cl最佳浓度分别为2.35％，0.36％，1.35％。优化后液体发酵液中脂肪酶活力提高到31.85 U/mL，比初始酶活力14.16 U/mL提高了2.25倍，表明单因子-响应面结合法可显著优化白地霉Y162液体发酵产脂肪酶条件。
成体干细胞来源广泛，无伦理争议，成为近几年的关注热点。研究表明以骨髓来源的间充质干细胞为代表的成体干细胞具有较强的多系分化潜能，可以广泛的参与包括肺在内的受损组织的修复与重建。在动物实验中已观察到，供体来源的成体干细胞可以定向分化为受损肺组织的多种功能细胞，并且有抑制纤维化等病变产生的能力。在本文中，回顾了近年来与肺损伤重建和疾病治疗相关的干细胞研究的最新进展，并探讨了成体干细胞治疗肺疾病与损伤的临床应用前景。
点饱和突变技术是蛋白质工程中的一门新兴技术，它通过对目的蛋白的编码基因进行改造，短时间内获取靶位点氨基酸分别被其它19种氨基酸替代的突变子。此技术不仅是蛋白质定向改造的强有力工具，而且是蛋白质结构－功能关系研究的重要手段。本文概述了几种常用点饱和突变技术，介绍了其在蛋白质工程中的应用状况，讨论了其在应用中的问题，展望了其应用前景。
EST(expressed sequence tags ,EST) 是一段长约150～500 bp的基因表达的外源序列片段，是由大规模随机挑取的cDNA克隆测序得到的组织或细胞基因组的表达序列标签。一个EST代表生物某一时期的某种组织或细胞的一个表达基因。本文主要综述了EST技术的原理方法，哺乳动物早期胚胎研究的理论基础以及EST技术在早期胚胎研究方面的应用，并讨论了利用EST进行研究分析的发展趋势。
miRNA是一类在多种基因调控过程中起重要作用的小RNA分子。最近已经发现了许多病毒编码miRNAs，这表明病毒也利用这一重要的基因调控模式。尽管大多数病毒编码miRNAs的功能还不知道，但是目前已经发现一些病毒miRNAs参与了CTL逃避、潜伏感染介导和凋亡抑制等过程。揭示病毒miRNA（viral miRNA，vmiRNA）在致病过程中的作用不仅有助于开发有效的抗病毒疗法，而且能为开发抗病毒药物提供新的分子靶标。因此，本文就将vmiRNAs的最新研究进展做以综述。
使用高通量方法学来检测基因表达情况在最近几年已非常普遍。微集芯片技术可同时定量成千上万的基因转录本。基因表达综合数据库（Gene Expression Omnibus 简称GEO）是目前最大的而且完全公开的高通量分子丰度数据库，主要储存基因表达数据。该数据库以一个灵活开放的设计理念，允许用户或科研人员来递呈，保存和检索多种不同类型的数据。本文综合描述一下近年来该数据库在基因表达数据挖掘中的应用，同时介绍一些通过使用用户友好网络界面能有效探索、查询和再现数百个实验和数百万个基因表达谱的工具，以方便数据进行挖掘和可视化。登录GEO公用数据库的网址为：http://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo.
随着功能基因组学的发展，表达序列标签(Expressed Sequence Tags, ESTs)已经成为开发以PCR为基础的新型分子标记的重要资源。本文综述了植物功能基因组研究中出现的EST-SSR、CAPS、SNP、SRAP和TRAP等新型分子标记的基本原理和特点。这些标记具有其显著的优势，如开发简便、信息量高和通用性好等，尤其是由于它们来源于基因编码区（ORFs)，因此具有很高的物种间通用性，并且其多态性与基因功能变异相关联。目前，这些功能基因分子标记已广泛应用于遗传图谱构建、重要性状基因定位、比较作图、遗传多样性和品种鉴别、分子标记辅助选择育种等研究中。在文章最后简要介绍了作者所在实验室近年来所开展的功能基因分子标记工作，并说明了在使用这些功能基因分子标记时可能会出现的问题。
植物生产外源蛋白日益受到重视，是一个安全廉价的生产系统。植物油体表达系统利用油素蛋白的高表达性和易分离特性改进了植物生物反应器下游加工技术、降低了高纯度药用蛋白的生产成本。本文介绍了油体和油素蛋白的组成结构等特征，重点阐述了国内外各领域用植物油体表达系统生产外源蛋白的研究进展，探讨了油体系统的优势和存在的问题。本实验室利用油体系统开发酸性成纤维细胞生长因子(haFGF)医类新药，生物活性检测正在进行中。油体表达系统作为药用蛋白的新来源，将得到逐步的完善及更广泛的应用。
