蛇毒纤溶酶Alfimeprase在毕赤酵母中的优化表达及活性鉴定

中国生物工程杂志

2007, Vol. 27

Issue (5): 28-33

研究报告

蛇毒纤溶酶Alfimeprase在毕赤酵母中的优化表达及活性鉴定

史婧张守涛齐亚飞郭蔼光

陕西杨凌西北农林科技大学西北农林科技大学陕西省农业分子生物学重点实验室西北农林科技大学陕西省农业分子生物学重点实验室陕西杨凌西北农林科技大学

Optimized Expression of snake fibrinolytic enzyme Alfimeprase in Pichia pastoris and its Activity Identification

全文: PDF(588 KB) HTML

摘要：

摘要 Alfimeprase(ALF)是蛇毒纤溶酶Fibrolase的N端突变体，有纤溶活性而无出血活性。通过双酶切从克隆载体上获取目的基因alf，并将其克隆至毕赤酵母分泌型表达载体pPICZα A，经高效电转化、Zeocin筛选鉴定及培养条件pH、每天甲醇流加终浓度、菌体生长密度和甲醇诱导时间的优化，获得了重组ALF(rALF)高表达菌株pPICZ? A-alf / GS115，且在优化条件下rALF的最高产量达425 mg/L。通过His•bind柱纯化后，rALF纯度高达95 %，SDS-PAGE和Western blot分析表明rALF的分子量约为24 kDa，且能与一抗特异结合。纤维蛋白平板法纤溶活性鉴定结果进一步说明rALF获得了高活性分泌表达。这即为ALF的深入研究和工业化生产应用奠定了重要基础。

关键词： 毕赤酵母; ALF; rALF; 纤维蛋白平板法

Abstract:

Abstract Alfimeprase(ALF) is a recombinantly modified variant of non-hemorrhagic zinc metalloproteinase fibrolase. By digestion with the clone vector p43-alf, the target gene alf was obtained and cloned into the Pichia pastoris expression vector pPICZα A, through high efficiency transformation and Zeocin selection, the recombinant strains of pPICZ?A-alf / GS115 were obtained. After culture parameters of pH value, methanol daily addition concentration, cell density and methanol induction time points were optimized, the production of recombinant Alfimeprase (rALF) reached up to 425 mg/L. By His•Bind chromatography purification, the purity of secreted rALF was as high as 95 %. SDS-PAGE and western blot analysis showed that rALF had a molecular weight of 24 kDa and bound specifically to mouse anti-His• tag monoclonal antibody, activity identification results of the modified fibrin plate method also demonstrated that the secreted rALF had high fibrinolytic activity. Thus the report set up an important foundation for further studies and industrial production of ALF.

Key words: Pichia pastoris Alfimeprase rALF fibrin plate method

收稿日期: 2006-12-18 出版日期: 2007-05-25

通讯作者: 郭蔼光

	服务
	把本文推荐给朋友
	加入引用管理器
	E-mail Alert
	RSS
	作者相关文章
	张守涛
	郭蔼光
	齐亚飞
	史婧

引用本文:

史婧,张守涛,齐亚飞,郭蔼光. 蛇毒纤溶酶Alfimeprase在毕赤酵母中的优化表达及活性鉴定[J]. 中国生物工程杂志, 2007, 27(5): 28-33.

. Optimized Expression of snake fibrinolytic enzyme Alfimeprase in Pichia pastoris and its Activity Identification. China Biotechnology, 2007, 27(5): 28-33.

链接本文:

https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/ 或 https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/Y2007/V27/I5/28

[1]	陈中伟,郑璞,陈鹏程,吴丹. 耐热植酸酶突变体的筛选及性质研究 ^*[J]. 中国生物工程杂志, 2021, 41(2/3): 30-37.
[2]	陈鑫洁,钱芷兰,刘启,赵清,张元兴,蔡孟浩. 毕赤酵母底盘芳香族氨基酸合成途径改造生产肉桂酸及对香豆酸^*[J]. 中国生物工程杂志, 2021, 41(10): 52-61.
[3]	石鹏程, 纪晓俊. 酵母系统表达人表皮生长因子研究进展 ^*[J]. 中国生物工程杂志, 2021, 41(1): 72-79.
[4]	田园,李艳玲. 基于重组毕赤酵母的fusaruside生物合成 ^*[J]. 中国生物工程杂志, 2019, 39(7): 8-14.
[5]	彭强强,刘启,徐名强,张元兴,蔡孟浩. 新型重组毕赤酵母产人胰岛素前体的表达工艺研究 ^*[J]. 中国生物工程杂志, 2019, 39(7): 48-55.
[6]	严建,贾禄强,丁健,史仲平. 甲醇周期诱导控制强化毕赤酵母生产猪α干扰素 ^*[J]. 中国生物工程杂志, 2019, 39(6): 32-40.
[7]	姚银,闵琪,熊海容,张莉. 木聚糖酶和甘露聚糖酶在毕赤酵母中的共表达及产酶分析 ^*[J]. 中国生物工程杂志, 2019, 39(3): 37-45.
[8]	张文玉,魏东升,钱江潮. 共表达PDI1、MDH1和HAC1基因对重组毕赤酵母分泌表达葡糖氧化酶的影响 ^*[J]. 中国生物工程杂志, 2019, 39(10): 24-33.
[9]	王彤,徐岩,喻晓蔚. 毕赤酵母Kex2蛋白酶的同源表达及酶学性质 ^*[J]. 中国生物工程杂志, 2019, 39(1): 38-45.
[10]	程功,焦思明,任立世,冯翠,杜昱光. 枯草芽孢杆菌壳聚糖酶水解制备低脱乙酰度壳寡糖及其组分分析 ^*[J]. 中国生物工程杂志, 2018, 38(9): 19-26.
[11]	唐健雪,肖永乐,彭俊杰,赵世纪,万小平,高荣. 融合抗菌肽基因在重组毕赤酵母的表达及体外活性研究 ^*[J]. 中国生物工程杂志, 2018, 38(6): 9-16.
[12]	张潘潘,许延吉,王之可,刘晓,李素霞. 重组猪胰蛋白酶及其R122位点突变体在毕赤酵母中的高效表达及其性质研究[J]. 中国生物工程杂志, 2018, 38(5): 56-65.
[13]	黄鹏,杜望春,施尉珺,饶玉良,孙庆文,张宁. 人源类溶菌酶蛋白6的功能研究及生理特性分析 ^*[J]. 中国生物工程杂志, 2018, 38(3): 1-8.
[14]	焦思明,程功,张毓宸,冯翠,任立世,李建军,杜昱光. 里氏木霉几丁质酶表达及其水解产物组成与结构分析 ^*[J]. 中国生物工程杂志, 2018, 38(10): 30-37.
[15]	黄鹏,阎丽萍,张宁,石金磊. 利用GAP启动子在毕赤酵母中组成型表达人鹅型溶菌酶2 ^*[J]. 中国生物工程杂志, 2018, 38(10): 55-63.

Viewed

Full text

Abstract

Cited

Shared

Discussed