利用氨甲蝶呤－琼脂糖凝胶进行噬菌体展示人肝脏cDNA文库筛选的方法研究

中国生物工程杂志

2007, Vol. 27

Issue (10): 70-74

研究报告

利用氨甲蝶呤－琼脂糖凝胶进行噬菌体展示人肝脏cDNA文库筛选的方法研究

于晓明张维冰张丽华张玉奎

中国科学院大连化学物理研究所中国科学院大连化学物理研究所中国科学院大连化学物理研究所中国科学院大连化学物理研究所

Screening of phage displayed cDNA library of human liver against methotrexate on agrose gel matrix

全文: PDF(593 KB) HTML

摘要：

目的：利用氨甲蝶呤（MTX）偶联琼脂糖凝胶吸附法从人肝脏细胞cDNA噬菌体展示文库中筛选与MTX相互作用的蛋白。方法：以偶联于琼脂糖凝胶表面的MTX为配基，通过"结合－洗脱－扩增"过程筛选与MTX相互作用的噬菌体。利用PCR对筛选结果进行监测，对筛选得到的噬菌体PCR产物进行序列测定和基因同源性分析。结果：通过五轮亲和筛选富集到特异噬菌体克隆，再通过PCR获得cDNA插入片段。通过BLAST程序搜索GenBank，证明筛选到的片段与人PI-3K相关蛋白激酶 SMG-1异构体1 蛋白同源性达100％。结论：利用偶联MTX的琼脂糖凝胶作为筛选基质，从T7噬菌体展示cDNA文库中富集特异噬菌体是一种方便、高效的MTX相互作用靶蛋白筛选方法。本方法可为探讨小分子药物的分子作用机制提供借鉴和参考.

关键词： 噬菌体展示技术; 肝脏细胞; cDNA文库; 氨甲蝶呤; 相互作用

Abstract:

The screening of the specific interaction between proteins displayed on phage displayed human liver cDNA library with methotrexate was carried out. Methods: With methotrexate immobilized on agarose gel, the affinity selection process of "binding-eluting-amplifying" was performed for five rounds to enrich the specific phage clones. PCR was performed to monitor the selection process, and the amplification products were sequenced and searched in GenBank by BLAST to find the obtained target proteins with high similarity. Results: The PCR products of the selected phage clones were proven with identical sequence with PI-3K related kinase SMG-1 isoform 1. Conclusions: The screening of specific proteins by using affinity selection of phage displayed cDNA library with small-molecule drug immobilized on agarose was an efficient and convenient method. It might be good to search for the candidate targets of the drug molecules, and might provide clues for the further studies of drug mechanism and toxocity.

Key words: phage display human liver cDNA methotrexate interaction

收稿日期: 2007-06-25 出版日期: 2007-10-25

通讯作者: 张丽华

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于晓明,张维冰,张丽华,张玉奎. 利用氨甲蝶呤－琼脂糖凝胶进行噬菌体展示人肝脏cDNA文库筛选的方法研究[J]. 中国生物工程杂志, 2007, 27(10): 70-74.

. Screening of phage displayed cDNA library of human liver against methotrexate on agrose gel matrix. China Biotechnology, 2007, 27(10): 70-74.

链接本文:

https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/ 或 https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/Y2007/V27/I10/70

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