人HMGB1分子的克隆、重组蛋白表达与生物学活性

中国生物工程杂志

研究报告

人HMGB1分子的克隆、重组蛋白表达与生物学活性

刘洪波范学工 Haichao Wang 彭建萍黄建军李宁

中南大学湘雅医院感染病科中南大学湘雅医院感染病科信阳师范学院生命科学学院信阳师范学院生命科学学院中南大学湘雅医院传染科

Clone、expression of Human HMGB1 gene and biological activity assays of HMGB1 recombinat protein

全文: PDF HTML

摘要： 采用RT-PCR,从重症肝炎病人外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells PBMCs）的mRNA中扩增高迁移率族蛋白1（high mobility group box－1 protein，HMGB1）基因，构建重组表达质粒pGEX4T-1-HMGB1，转化入大肠杆菌，测序证实其序列与基因数据库中HMGB1基因(NM_002128)一致。诱导表达的融合蛋白GST-HMGB1，用Glutathione Sepharose 4B亲和层析纯化，经Thrombin酶切得到HMGB1。结果显示：经Western-blotting检测，GST-HMGB1 和HMGB1均具有免疫活性； ELISA和MTT检测发现，两者均能刺激RAW264.7细胞产生大量TNF-α，明显刺激HeLa细胞增殖。GST-HMGB1具有良好的生物学活性,为今后的研究打下了基础。

关键词： 原核表达; 纯化; 免疫活性; 生物学活性; 克隆; HMGB1

Abstract: HMGB-1 (high mobility group box－1 protein) gene was amplified by RT-PCR from the mRNA isolated from peripheral blood mononuclear cells (PMBCs) in a patient with liver failure. A recombinant expression vector of GST-HMGB1 was constructed in pGEX4T-1,and transformed into E.coli. It was sequenced and confirmed to be identical to the HMGB-1 gene in data bank(NM_002128). Recombinant protein GST-HMGB1 was purified by Glutathione Sepharose 4B affinity chromatography, and HMGB1 were obtained by thrombin digestion. GST-HMGB1 and HMGB1 were binded to HMGB1's antibody in Western-blotting. From ELISA and MTT assays, the results showed that two proteins may stimulate RAW264.7 cells to secret TNF-α, and induc Hela cells proliferation markedly. GST-HMGB1 had good biological activity and it is employed in further study.

Key words: prokaryotic expression purify immunine activity biological activity Cloning HMGB1

收稿日期: 2006-04-26 出版日期: 2006-11-25

通讯作者: 范学工

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刘洪波,范学工,Haichao,Wang,彭建萍,黄建军,李宁. 人HMGB1分子的克隆、重组蛋白表达与生物学活性[J]. 中国生物工程杂志, .

. Clone、expression of Human HMGB1 gene and biological activity assays of HMGB1 recombinat protein. China Biotechnology, .

链接本文:

https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/ 或 https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/Y2006/V26/I11/20

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