霍乱弧菌CTB基因的克隆、表达及重组蛋白活性分析

中国生物工程杂志

研究报告

霍乱弧菌CTB基因的克隆、表达及重组蛋白活性分析

张国广曾雅明李东霄张红心陈亮

厦门大学生命科学学院细胞生物学研究室信阳师范学院生命科学学院信阳师范学院生命科学学院信阳师范学院生命科学学院厦门大学生命科学院细胞研究室

Cloning and Expression of Vivrio Cholerae CTB Gene and the Recombinant CTB Protein Activation Assay

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摘要： 霍乱弧菌CTB蛋白具有免疫佐剂活性。本研究根据已发表CTB基因的序列设计一对引物，从一株霍乱弧菌中扩增出CTB基因，测序后发现该基因全长375 bp，与国内分离的六株CTB基因的同源性达96.0%～99.2%。将该基因与pTWIN1连接构建了原核表达载体pTWIN1-CTB，重组表达载体转化BL21（DE3）表达菌株，0.8 mmol/L IPTG诱导4 h后，收获的细菌总蛋白SDS-PAGE电泳显示CTB在原核表达系统中得到表达，融合蛋白大小与理论值符合，蛋白产量占细菌总蛋白的20%左右，主要以包涵体形式存在，western杂交和GM1-ELISA结果表明重组蛋白具有免疫原性和粘膜佐剂活性。

关键词： 粘膜佐剂活性; 霍乱弧菌CTB基因; 原核表达

Abstract: CTB protein possessed mucosal adjuvant immunoactivity. The CTB gene was amplified by PCR method from a strain V. cholerae. The nucleotide sequence of CTB gene was 375 bp and shared 96.0%~99.2% homology with other 6 CTB genes. The recombinant plasmid pTWIN1-CTB was transformed E. coli strain BL21(DE3) and was expressed with 0.8 mmol/L IPTG. The molecular weight of expression products was identical with expectative weight by SDS-PAGE electrophoresis. The CTB fusion proteins mainly assembled inclusion bodies and the outputs of proteins were approximately 20% of the total bacterial proteins. The CTB proteins possessed mucosal immunoactivity by GM1-ELISA assay.

Key words: expression of CTB gene GM1-ELISA Vibrio Cholerae CTB gene

收稿日期: 2006-05-29 出版日期: 2006-10-25

通讯作者: 陈亮

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张国广,曾雅明,李东霄,张红心,陈亮. 霍乱弧菌CTB基因的克隆、表达及重组蛋白活性分析[J]. 中国生物工程杂志, .

. Cloning and Expression of Vivrio Cholerae CTB Gene and the Recombinant CTB Protein Activation Assay. China Biotechnology, .

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https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/ 或 https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/Y2006/V26/I10/13

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