sTNFRⅡ和VIP融合蛋白的基因克隆表达、纯化及活性检测

中国生物工程杂志

研究简报

sTNFRⅡ和VIP融合蛋白的基因克隆表达、纯化及活性检测

王虹曾位森陈金华王珊珊刘丹杨艳妮李玲陈百宏

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The procaryotic expression, purification and activity analysis of VIP-sTNFRⅡ

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摘要： 可溶性肿瘤坏死因子受体Ⅱ（sTNFRⅡ）和血管活性肠肽（VIP）对类风湿性关节炎（RA）均有治疗作用，但两者的作用机制不同。制备两者融合表达蛋白，可能具有更好的防治类风湿关节炎的作用。用含有VIP全基因序列的上游引物和sTNFRⅡ的下游引物，用PCR扩增出由连接序列将VIP和sTNFRⅡ基因连接的片段，再亚克隆到原核表达载体pET32a，在大肠杆菌DH5α内诱导表达。表达的产物经离子交换、疏水层析纯化，并用体外中和试验检测其活性。结果显示：构建的pET32a-VIP-sTNFRⅡ表达载体在大肠杆菌DH5α内包涵体表达，离子交换层析纯化后的融合蛋白有较强的生物活性，为将来应用打下基础。

关键词： 离子交换柱纯化; 疏水层析; sTNFRⅡ; VIP

Abstract: A prokaryotic expression plasmid containing VIP (vasoactive intestinal peptide) and sTNFRⅡ(soluble tumor necrosis factor receptor II ) genes was constructed. The sTNFRⅡ was cloned by PCR by using special primers which contained VIP gene ORF and a linker in its forward primer. The amplified fragment was inserted into the expression vector pET32a between Bam HI and Hind Ⅲ restriction sites. Transformed E coli DH5 by pET32a-VIP- sTNFRⅡexpressed the fusion protein. After being identified, the protein was purified by ion exchange chromatography and by hydrophobic interaction chromatography. The reconstructed protein showed high bio-activity and could be applied for further use.

收稿日期: 2006-03-06 出版日期: 2006-05-25

通讯作者: 王虹

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引用本文:

王虹,曾位森,陈金华,王珊珊,刘丹,杨艳妮,李玲,陈百宏. sTNFRⅡ和VIP融合蛋白的基因克隆表达、纯化及活性检测[J]. 中国生物工程杂志, .

. The procaryotic expression, purification and activity analysis of VIP-sTNFRⅡ. China Biotechnology, .

链接本文:

https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/ 或 https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/Y2006/V26/I05/69

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