来源于E.coli和CHO表达系统的重组人β-NGF性质比较

中国生物工程杂志

研究报告

来源于E.coli和CHO表达系统的重组人β-NGF性质比较

姜静姜桂香

烟台麦得津生物工程股份有限公司烟台麦得津生物工程股份有限公司

Comparison of recombinant human β-NGF from E.coli and CHO in biochemical characters

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摘要： 基于原核表达系统极难表达具有正确三级结构的重组人β神经生长因子（rhNGF-β），E. coli是否能作为其工业化生产菌株存在争议。为此，将构建于E.coli体系，经表达体外复性后的rhNGF-β与中国仓鼠卵巢细胞（CHO）表达体系分泌的rhNGF-β，运用HPLC、SDS-PAGE、质谱、N-末端分析等手段以及鸡胚背根神经节（DRG）、 PC12 细胞体外测活法对制备产物进行分析、测定。结果表明：二者具有一致的理化性质和生物学活性，HPLC纯度均大于95%、生物学比活均不低于1.8 ng/U；经添加赋型剂制成冻干粉后，在温度37℃±2℃、相对湿度75%±5%条件下进行3个月加速试验，活性均不变。说明E. coli表达体系可生产质量均一、高生物学活性的rhNGF-β，且具有明显成本优势。

关键词： 表达; 稳定性; 重组人β神经生长因子; 复性

Abstract: AbstractThough prokaryotic cells could hardly express recombinant human beta nerve growth factor (rhNGF-β) with a proper threedimensional conformation, using of E. coli as a host for industrial production of rhNGF-β is controversial. Recombinant human beta NGF was expressed in E. coli and was refolded in vitro. The isolated products was shown to be consistent with those expressed and secreted by CHO cells in biochemical characters by SDS-PAGE, RP-HPLC, mass spectrometry, N terminal analysis and bioassay determined using DRG and PC12 cells. The products can be acquired with 95% purity, 1.8 ng/U biological activity from both expression system，which remain invariable biological activity when lyophilized in excipient and store at 37℃±2℃, RH 75%±5% for 3 months. Moreover, the product refolded from inclusion bodies of E. coli shows the predominance in homogeneity and the lower cost.

Key words: expression stability Renaturation

收稿日期: 2005-09-05 出版日期: 2006-02-25

通讯作者: 姜静

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姜静,姜桂香. 来源于E.coli和CHO表达系统的重组人β-NGF性质比较[J]. 中国生物工程杂志, .

. Comparison of recombinant human β-NGF from E.coli and CHO in biochemical characters. China Biotechnology, .

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https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/ 或 https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/Y2006/V26/I02/8

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