人白介素18(IL-18)RGD模体抗黑色素瘤细胞B16活性研究

中国生物工程杂志

研究报告

人白介素18(IL-18)RGD模体抗黑色素瘤细胞B16活性研究

卢忠民赵宝昌

大连医科大学生物化学和分子生物学教研室大连医科大学生物化学和分子生物学教研室

A study on construction of RGD motif in human interleukin-18 and its inhibitory activity on B16 melanoma

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摘要： 利用定点突变及DNA重组技术，在人白细胞介素18(IL-18)的cDNA序列中插入了GGC序列，使IL-18第39精氨酸残基和第40天冬氨酸残基之间插入一个甘氨酸残基，从而构建了RGD模体。此重组的cDNA序列构建入表达质粒pPIC9K，并转化Pichia Pastoris酵母GS115，利用表达系统进行了高效表达。用Sephadex G-100凝胶过滤纯化表达产物，获得初步纯化的蛋白。研究表明，IL-18在体外对黑色素瘤细胞株B16没有作用，而IL-18-RGD抑制作用明显，IC50 = 8.10μmol/L；应用小鼠动物模型研究结果显示，IL-18及IL-18-RGD均对黑色素瘤细胞B16有抑制作用，且IL-18-RGD比IL-18的作用强；同时,对鸡胚绒毛尿囊膜(chicken chorioallantoic membrane,CAM)血管生成的抑制实验发现，IL-18-RGD 对CAM血管生成的抑制作用也比IL-18强。但IL-18-RGD仍保存对PBMC诱导产生IFN-γ能力。结果提示，IL-18-RGD在具有抗炎，抗感染作用的同时增添了抑制肿瘤血管新的功能。

关键词： 毕赤酵母

Abstract: Using sitedirected mutagenesis and DNA recombinant technology, GGC fragment was inserted into human IL-18 cDNA. The mutated IL-18 cDNA was constructed into plasmid pPIC9K, then transformed into Pichia pastoris GS115 and efficiently expressed. A Glycine residue was inserted into the recombinant IL-18 between Arg39 and Asp40 to form a RGD motif. The mutated IL18 was termed IL-18-RGD. The protein was purified with Sephadex G100. The cell culture of melanoma B16 showed that IL-18-RGD efficiently inhibited B16 tumor growth, IC50 = 8.10μmol/L, but the inhibitory effect of IL-18 was not detected. Both IL-18-RGD and IL-18 showed inhibitory activities on mice loaded B16 in vivo, the inhibitory efffct of IL-18-RGD was stronger than that of IL-18. The inhibitory activities of IL-18-RGD and IL-18 on bFGF induced angiogenesis on chorioallantoic membranes were detected. There was no differences between IL-18-RGD and wild IL-18 in the activity of inducing IFN-γ in human PBMC.

收稿日期: 2006-02-08 出版日期: 2006-02-25

通讯作者: 赵宝昌

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卢忠民,赵宝昌. 人白介素18(IL-18)RGD模体抗黑色素瘤细胞B16活性研究[J]. 中国生物工程杂志, .

. A study on construction of RGD motif in human interleukin-18 and its inhibitory activity on B16 melanoma. China Biotechnology, .

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https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/ 或 https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/Y2006/V26/I02/13

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