产甘油假丝酵母产甘油关键酶基因在酿酒酵母中的表达

中国生物工程杂志

研究报告

产甘油假丝酵母产甘油关键酶基因在酿酒酵母中的表达

赵有玺饶志明沈微方慧英

江南大学工业微生物研究中心江南大学工业微生物研究中心江南大学工业微生物研究中心江南大学工业微生物研究中心

Expression of Key Enzymes in Glycerol Synthesis of Candida Glycerolgenesis in Saccharomyces Cerevisiae W303-1A

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摘要： 甘油是一种极其理想的耐高渗透压介质。利用PCR方法，从产甘油假丝酵母WL2002-5中扩增出了2个产甘油的关键酶基因GPD和GPP，分别编码3-磷酸甘油脱氢酶（glycerol 3-phosphate dehydrogenase, GPD）和3-磷酸甘油磷酸酶（glycerol 3-phosphate phosphatase, GPP）。利用T-Vector在Escherichia coli JM109中克隆得到大量的GPD和GPP基因，并成功构建了重组质粒pYX212-GPD和pYX212-GPP；通过LiAc转化法将重组质粒导入酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae W303-1A。初步实验结果表明：发酵过程中pYX212-GPD/S. cerevisiae W303-1A的生物量高于pYX212-GPP/S. cerevisiae W303-1A和野生型S. cerevisiae W303-1A；发酵72h后，pYX212GPD/S. cerevisiae W303-1A发酵液中甘油含量大约为12mmol/L，明显高于野生型S. cerevisiae W303-1A的甘油含量，而pYX212-GPP/S. cerevisiae W303-1A与野生型S. cerevisiae W303-1A在甘油含量上相差不大，均只有4mmol/L 左右。

关键词： 3-磷酸甘油磷酸酶; 酵母工程菌; 甘油; 3-磷酸甘油脱氢酶

Abstract: Glycerol is an ideal osmotolerant medium. Two genes of GPD and GPP encoding glycerol-3phosphate dehydrogenase and glycerol-3phosphate phosphatase, key enzymes in glycerol synthesis, were cloned from Candida glycerolgenesis WL2002－5 using PCR method. In Escherichia coli JM109, enough GPD and GPP genes were amplified using Tvector, furthermore, expression plasmids pYX212－GPD containing GPD gene and pYX212－GPP containing GPP gene were constructed, which were introduced into Saccharomyces cerevisiae W303－1A using LiAc transformation method successfully. Primary results showed that the biomass of pYX212－GPD/S. cerevisiae W303－1A was higher than those of pYX212－GPP/S. cerevisiae W303－1A and the wild type during the fermentation. After 72h fermentation, introduction of GPD gene could increase glycerol production to about 12mmol/L, while GPP gene had little effect on glycerol production (only 4mmol/L) in comparison with the wild type.

Key words: GPD GPP Yeast engineered strain Glycerol

收稿日期: 2006-01-25 出版日期: 2006-01-25

通讯作者: 赵有玺

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赵有玺,饶志明,沈微,方慧英. 产甘油假丝酵母产甘油关键酶基因在酿酒酵母中的表达[J]. 中国生物工程杂志, .

. Expression of Key Enzymes in Glycerol Synthesis of Candida Glycerolgenesis in Saccharomyces Cerevisiae W303-1A. China Biotechnology, .

链接本文:

https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/ 或 https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/Y2006/V26/I01/38

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