霍乱毒素B亚单位与胰岛素B链融合基因的克隆及原核表达分析

中国生物工程杂志

2005, Vol. 25

Issue (4): 56-61

论文

霍乱毒素B亚单位与胰岛素B链融合基因的克隆及原核表达分析

陈丽^1,2, 欧阳凤秀³, 钱炳俊⁴, 任宏³, 王强⁵, 姜庆五³, 王玉炯¹, 刘静波³, 梁婉琪², 潘爱虎²

1. 宁夏大学生命科学学院银川 750021;
2. 上海市农业科学院农业生物技术研究中心上海市农业遗传育种重点实验室上海 201106;
3. 复旦大学公共卫生学院上海 200032;
4. 复旦大学生命科学学院上海200433;
5. 南京大学生命科学学院南京 210093

^1,2

全文: PDF(635 KB) HTML

摘要：

构建了霍乱毒素B亚单位(choleratoxinBsubunit,CTB)与胰岛素(insulin)B链的融合基因CTB-INSB,将该融合基因克隆到大肠杆菌表达载体pET-30a(+)中,获得重组质粒pETCIB;并将该质粒转入大肠杆菌菌株BL21(DE3)中;重组菌株经IPTG诱导后的表达产物经15％SDS-PAGE分析表明可以表达融合蛋白,其分子量约为15.4kDa,且主要以包涵体形式存在,约占全菌蛋白的30％。含CTB-INSB重组蛋白的包涵体经变性和复性后,可在体外自组装成五聚体结构。Westernblotting分析结果显示CTB-INSB可分别被霍乱毒素的抗体和胰岛素的抗体识别,表明该蛋白具有霍乱毒素B亚单位与胰岛素的双重抗原性。同时GM1-ELISA分析结果表明CTB-INSB在体外可与神经节苷脂GM1(monosialoganglioside)特异结合,进一步证实了它能够形成类似CTB五聚体的高级结构,具有生物活性。

关键词： 霍乱毒素B亚单位; 胰岛素B链; 融合基因CTB-INSB; 原核表达; 神经节苷脂GM1

出版日期: 2005-04-25

基金资助:

国家自然科学基金资助项目(30170818)

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陈丽, 欧阳凤秀, 钱炳俊, 任宏, 王强, 姜庆五, 王玉炯, 刘静波, 梁婉琪, 潘爱虎. 霍乱毒素B亚单位与胰岛素B链融合基因的克隆及原核表达分析[J]. 中国生物工程杂志, 2005, 25(4): 56-61.

链接本文:

https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/Y2005/V25/I4/56

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