重组蓖麻毒素A链蛋白的可溶性表达、纯化与抗原性分析

中国生物工程杂志

2005, Vol. 25

Issue (4): 47-51

论文

重组蓖麻毒素A链蛋白的可溶性表达、纯化与抗原性分析

孙嗣梅¹, 王利春², 康琳¹, 王景林¹

1. 中国人民解放军军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物与生物安全国家重点实验室北京100071;
2. 内蒙古大学生物工程中心呼和浩特 010020

全文: PDF(527 KB) HTML

摘要：

用PCR方法从克隆质粒pUC19-RTA中扩增出蓖麻毒素A(RTA)链基因,序列分析正确后,亚克隆到原核表达质粒pET-His中,构建重组表达质粒pET-HisRTA,再转化到E.coliBL21(DE3)plysS中获得表达工程菌株BL21/pET-HisRTA。该工程菌在30℃经0.4mmol／LIPTG诱导4h后获得可溶性表达的目的蛋白,约占菌体总蛋白的18.45％,SDS-PAGE分析显示表达的蛋白区带与RTA相对分子量相符,约32kDa左右。表达产物经Ni-NTA亲和层析法一步纯化,蛋白纯度约达97.53％,并可得到约18mg/L重组RTA蛋白。Western印迹和间接ELISA结果证明,重组RTA蛋白与抗天然蓖麻毒素多抗可发生特异性的抗原抗体反应,具有良好的抗原性,这为制备RT特异性抗体及建立RT的检测方法奠定了基础。

关键词： 蓖麻毒素A链; 克隆与表达; 亲和纯化; 抗原性

出版日期: 2005-04-25

基金资助:

中国人民解放军军事医学科学院创新基金资助项目

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引用本文:

孙嗣梅, 王利春, 康琳, 王景林. 重组蓖麻毒素A链蛋白的可溶性表达、纯化与抗原性分析[J]. 中国生物工程杂志, 2005, 25(4): 47-51.

链接本文:

https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/Y2005/V25/I4/47

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