学术交流应该是学会的头号使命 ,一个学会如果不搞学术活动 ,就不能称之为学会。如果只满足于搞一些应景式的学术活动 ,缺乏学术亮点 ,这些活动的社会影响和学术价值也必然微乎其微。日前在山东日照召开的代谢工程和工业生物技术学术研讨会 ,是中国生物工程学会努力打造精品学术活动的又一次尝试。我们体会成功的学术活动必须要有精心的主题策划。科学发展已经证明 :代谢工程是人类定向干预生物体代谢途径的锐利武器 ,是传统生...
核基质附着区 (matrixattachmentregions,MARs)是与核基质 (或核骨架 )特异结合的DNA序列 ,属于非编码序列 ,富含AT。通过与核基质的结合 ,它能使染色质形成独立的环状结构 ,调控基因的转录和表达 ,减少由于位置效应引起的转基因沉默。MARs在提高转基因表达水平、消除转基因个体间表达水平的差异、抑制转基因沉默等方面起着重要的作用。就MAR的一些结构功能特征及其在基因工程中的应用等方面进行了阐述。
血管紧张素转化酶 (angiotensin I convertingenzyme ,ACE)在血压调节方面起着重要的作用 ,当其受到抑制时血压就会降低。许多合成的ACE抑制剂被广泛地应用于临床 ,但会造成多种副作用。近年来 ,对天然ACE抑制肽的研究表明 ,一些来源于蛋白酶解产生的活性肽可以对ACE起到有效的抑制作用。综述了血管紧张素转化酶的抑制肽的降压原理 ,种类和来源以及结构特点等的研究进展 ,并对其应用前景进行了展望。
利用转基因植物作为生物反应器生产疫苗是近几年发展起来的一个崭新的领域 ,并取得了许多成就。就植物性口服疫苗的最新研究进展进行了综述 ,并展望了这一领域的发展前景与存在问题。
慢病毒是逆转录病毒的一种 ,具有逆转录病毒的基本结构 ,但也有不同于逆转录病毒的组份和特性 ,作为基因治疗载体发展起来 ,最近已用于转基因动物制备。慢病毒像其它逆转录病毒一样 ,其基因组经逆转录后能整合在宿主DNA上 ;由于病毒载体经改构后 ,不在宿主细胞增殖 ,不会导致寄主细胞的死亡 ,被它感染的或转化的动物细胞能够连续传代 ;这种载体的最大优势是能感染静止细胞和不产生嵌合体动物。详细介绍了慢病毒载体构建原理、近年慢病毒载体在转基因动物制备方法和应用研究的新进展。
SSH是一种基于抑制PCR和差减杂交技术建立的 ,在转录水平上研究基因表达的技术 ,具有稳定、高效、可靠的特点 ,可对生物的生长、发育、衰老、死亡等生命过程及生物或非生物逆境胁迫对生物所造成的影响等进行全面、系统的分析。简单介绍了SSH的基本原理、技术要点 ,并对技术本身的改进和提高及在转录水平上与其它技术方法的比较及其在植物基因分离上的应用进行了概述。
滚环DNA扩增 (rollingcircleDNAamplification ,RCA)是一种等温信号扩增方法 ,其线性扩增倍数为 1 0 5,指数化扩增能力大于 109,产生的扩增产物连接在固相支持物 (如玻片、微孔板等 )表面的DNA引物或抗体上。RCA是一种适合在芯片上 (on chip)进行信号扩增的新技术 ,它既能提供研究分析的敏感性和特异性 ,又能保持立体分析的多元性。RCA亦是一种痕量的分子检测方法 ,可用于极其微量的生物大分子和生物标志的检测与研究
用PCR的方法从人胎肝cDNA文库中得到人内皮抑素基因 ,克隆测序正确后连接到硫氧还蛋白融合表达载体上 ,转化大肠杆菌BL2 1 (DE3)得到表达人内皮抑素的工程菌。用IPTG诱导表达 ,表达量达到全菌蛋白的 64%。经分析硫氧还蛋白可以辅助内皮抑素可溶性表达 ,表达的融合蛋白保持了天然蛋白的免疫学特性。而且表面带有多聚组氨酸的突变的硫氧还蛋白还简化了蛋白纯化的步骤 ,使融合蛋白可以通过固相金属螯和层析 (IMAC)的方法纯化。纯化后的融合蛋白经IgA蛋白酶的切割可得到大小正确的重组人内皮抑素 ,用此方法获得的重组人内皮抑素可以在CAM试验中抑制新生血管的形成。高效可溶型表达内皮抑素的工程菌的构建成功 ,为内皮抑素的生产应用打下了良好的基础。
将编码大连蛇岛蝮蛇类凝血酶 (Gloshedobin)的基因克隆于表达载体pET-32a( + )中 ,以融合蛋白形式在大肠杆菌中获得表达。在 2 5℃下经 1mmol/LIPTG诱导 6h ,SDS-PAGE和蛋白质印迹分析表明 ,部分融合蛋白以可溶形式存在于大肠杆菌的细胞质中。针对金属螯合亲和层析分离某些含His-标签重组蛋白质时专一性不高 ,并且存在配基泄漏的缺陷 ,设计合成了以抗重组类凝血酶的鸡卵黄免疫球蛋白为配基的免疫亲和层析柱。通过疏水色谱OctylSepharoseFF ,IgY免疫亲和层析以及强阴离子交换色谱SourceQ等三步柱色谱分离纯化获得比活力为 454.7U/mg的重组蛇毒类凝血酶 ,活力回收率为 34.8%。蛋白质印迹分析和纤维蛋白原凝结活性分析表明 ,该表达产物具有相应的免疫活性和酶活性
为了实现蚓激酶在真核细胞的高效稳定表达 ,人工合成了全长 849bp ,不含罕用密码子的蚓激酶F-Ⅲ-1cDNA序列 ,并以其为目的基因 ,构建以山羊β-酪蛋白启动子为上游调控序列的乳腺组织特异性表达载体pBLK和重组逆转录病毒表达载体pLN-bCP-LK。质粒pBLK 40 0 μg直接注入稳定泌乳期奶山羊乳腺 ,以纤维蛋白平板溶圈法 (FAPA)检测奶样纤溶活性。结果显示 ,注射后 3～ 60h ,奶样有明显纤溶活性 ,其中 6～ 9h活性最高。脂质体介导质粒pLN-bCP-LK转染PA317细胞系 ,5 0 0mg/LG418筛选后获得 4株高产毒细胞系 ,产毒滴度达 1× 1 0 4～ 1× 1 0 5CFU/ml水平。产毒细胞上清 1 0ml直接注入临产前两周的山羊乳腺 ,隔日以等量再注 1次 ,产羔后其奶样即有明显纤溶活性 ,注后第 45日纤溶活性仍无明显降低。
基于猪瘟病毒主要保护性抗原———E2囊膜糖蛋白有两个相对独立的抗原结构单位———B/C抗原区和A/D抗原区 ,设计引物扩增编码猪瘟病毒E2蛋白B/C抗原区的基因 ,将大小为261bp的PCR产物插入含有强启动子PAOX1和α-MF信号肽序列的巴斯德毕赤酵母 (Pichiapastoris)表达载体pPICZαC中 ,构建成重组质粒pPICZα-BC ,酶切线性化后电穿孔导入巴斯德毕赤酵母菌X33 中 ,经ZeocinTM 筛选得到 3株高拷贝转化子 ,甲醇诱导表达 ,SDS-PAGE和Westernblot及ELISA试验表明 ,酵母培养上清液中含有具有良好反应原性的E2蛋白。为研究亚单位疫苗或诊断抗原打下坚实基础。
根据Slightom等RiA4TL-DNA序列分析结果 ,设计了一对引物 ,以Ri 质粒DNA为模板 ,利用PCR方法对rolC基因进行了扩增。利用pGEM-T载体对rolC基因进行了克隆和测序。结果 ,克隆的DNA片段序列与报道的ORF12阅读框内的rolC序列一致。将pGEM-T-rolC用限制性内切酶SacI酶切 ,与经SmaI酶切CIAP去磷酸化的pUC19质粒重组 ,经蓝白斑筛选得到正向重组的pUC19-rolC。再用Xbal-SacI双酶切pUC19-rolC与pBI121 ,将rolC基因定向克隆到具有CaMV35S启动子的pBI121表达质粒上 ,构建成植物表达载体pBI-rolC。用pBI-rolC转化农杆菌LBA4404构建成的LBA4404 (pBI-rolC)工程菌转化人参子叶 ,获得发根的表达。经PCR扩增分子检测 ,证明rolC基因确已整合到人参发根基因组中。经对转化的人参发根中单体皂苷含量测定 ,发现发根中含有所检测的 7种人参单体皂苷 ,总皂苷含量达 18.55mg/g。
对酶系组成、pH、酶解温度和酶解时间等影响树状多节孢原生质体制备和再生的因素和原生质体诱变进行了研究。结果表明 ,原生质体制备和再生的最佳条件为 :用pH5.5～ 6.0的0.7mol/LNaCl配制由 3%溶壁酶 + 3%蜗牛酶 + 1 %的溶菌酶 + 3%纤维素酶组成的复合酶系 ( 1ml酶液/2 5 0mg湿菌体 ) ,在 30℃恒温水浴条件下酶解 6h ;然后 ,将获得的原生质体过滤洗涤后 ,在含0.7mol/ LNaCl的PDA再生培养基上 ,采用双层平板培养法再生制备到的原生质体。树状多节孢紫杉醇产生菌原生质体诱变的最佳条件为 :30w紫外灯、距离 30cm、照射 5 0s;UV + 0.6%LiCl复合诱变、照射时间 40s,诱变菌株经初筛和复筛 ,选出了两株高产紫杉醇的原生质体诱变菌株———UV40-19和UL50-6,其产量从出发菌株紫杉醇的产量 ( 314.07μg /L)分别提高至 376.38μg/L和392.63μg/L。
从孵化 5 5天的鸡胚生殖腺中分离得到大量原始生殖细胞 (PGCs)集落 ,这些集落的细胞经多次克隆传代具有胚胎生殖细胞 (EG)的诸多特征 ,如有连续传代的能力 (传至第 9代 ) ,细胞集落有典型鸟巢状结构 ,PAS染色阳性 ,AKP染色阳性 ,在无饲养层无分化抑制因子LIF时可以自发分化成几种细胞类型 ,包括成纤维细胞、神经细胞、自律细胞等 ,悬浮培养时具有形成类胚体的能力。上述发现表明该细胞具EG细胞的诸多特性 ,为类EG细胞
目的 :研究在轻度修饰低密度脂蛋白 (mm-LDL)诱导下差异表达的基因 ,探讨动脉粥样硬化发生的分子机制。方法 :用DDRT-PCR(differential displayreversetranscription-PCR)技术分析mm-LDL诱导下人血管内皮细胞的基因表达差异 ,并用反向Northern证实差异显示基因。结果 :mm-LDL诱导下人血管内皮细胞出现一些上调和下调的基因 ,上调基因有胸腺素β4、FGFRI原癌基因伴随蛋白、FK5 0 6结合蛋白、rTSβ蛋白和细胞间粘附分子 1 ;下调基因有Apobec-1结合蛋白 1、细胞色素B561和ERP72。结论 :体外mm-LDL可诱导HUVEC细胞一些基因表达水平变化 ,它们与血管内皮细胞发生病理变化和动脉粥样硬化斑块形成直接相关。
目的 :建立IgHV1抗原九肽荧光标记及分离纯化的方法。方法 :利用硫代磷酸化的原理以荧光试剂标记IgHV1抗原九肽 ,用葡聚糖凝胶 (Sephadex)G 1 5层析柱及聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)对荧光标记的IgHV1抗原九肽进行分离纯化并以毛细管电泳技术进行鉴定。结果 :用毛细管电泳技术对纯化后样品进行鉴定 ,其电泳图谱只出现单一峰。结论 :初步建立IgHV1抗原九肽荧光标记及分离纯化的方法
探讨了克拉维酸 (clavulanicacid ,CA)在发酵液中的降解因素 ,首先研究了培养基组分影响CA降解速率的大小 ,并计算出不同组分对其降解的速率常数 .然后 ,研究了发酵过程中在对数生长期和稳定期的克拉维酸降解速率常数。研究发现外界环境因素对CA降解速率的影响大小不同 ,通过对带棒链霉菌对数生长期和稳定期CA降解情况的研究 ,可以判断 ,在pH、温度等发酵条件一定的情况下 ,导致发酵后期CA严重降解的原因可能与菌体生长过程中产生的热敏性物质或者稳定期产生的次级代谢产物有关 。
以卵清白蛋白为载体蛋白合成了雌二醇的结合物用Cy3新型荧光染料标记结合物 ,作为雌二醇的竞争物 ,建立了以竞争法为基础的检测食品中雌二醇的免疫芯片新方法。用生物芯片点样仪在醛基化玻片表面点样制备免疫微阵列 ,以扫描仪检测反应结果 ,对雌二醇进行了定性定量检测。实验结果表明荧光信号随待测物浓度的降低而增强 ,待测物浓度在 0.001～ 0.4μg/ml的范围内有较好的线性趋势 ,检测范围为 1～ 0.001μg/ml。
应用分子克隆技术 ,分别将增强型绿色荧光蛋白 (enhancedgreenfluorescentprotein ,EGFP)、内部核糖体进入位点 (internalribosomeentrysite,IRES)和编码H-ras基因C端 2 0个氨基酸的DNA(rasc2 0 )片段插入真核表达载体pcDNA3,构建真核重组表达载体并将其命名为pZX。通过脂质体介导将该载体转染人宫颈癌细胞系HeLa ,培养过夜后在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白在细胞内的分布 ,并与pEGFP-C3质粒DNA转染该细胞系进行比较。结果表明 ,转染pZX载体的实验组细胞膜发出绿色荧光 ,而对照组绿色荧光则均匀弥散于整个细胞中 ,工具性载体pZX已构建成功
为了进一步了解中国丙型肝炎病毒基因型感染状态 ,我们建立了 5′ ＮＣＲＡＢＣ程序酶切分型法 :首先采用ＲＴＰＣＲ技术 5′ ＮＣＲ扩增ＨＣＶＲＮＡ阳性样品中的ｃＤＮＡ ,然后按照ＡＢＣ程序进行分型 ,Ａ应用ＢＨＨ(ＢｓｒＢⅠ ,ＨａｅⅡ ,ＨｉｎｆⅠ )复合内切酶消化 5′ ＮＣＲｃＤＮＡ ,Ｂ应用ＢｓｔＵⅠ消化 ,Ｃ应用ＨａｅⅢ消化 ,电泳检测片段大小。应用该方法对临床采集的ＨＣＶＲＮＡ阳性血清进行分型 ,在国内首次发...
美国资本市场是全世界交易最活跃、融资额最大、最健全成熟的市场。美国资本市场在生物产业的发展中起到了举足轻重的作用。同时 ,美国生物产业在全球生物产业中占有约 70 %的比重 ,是生物产业的发祥地 ,故美国生物企业的融资历程足以说明全球生物产业的融资历程。分析研究了美国生物产业融资状况、特点及几种新型的融资方式。
