构建人纤溶酶原饼环区5(hPK5)基因的原核可溶性表达载体并进行表达和纯化,获取大量高纯度、具有生物活性的hPK5蛋白。以纤溶酶原cDNA为模板,PCR扩增了hPK5基因,经过适当酶切后构建表达载体pET22b(+)hPK5,转入大肠杆菌BL21(DE3)进行表达并经组氨酸亲和层析获得纯化。带有重组质粒pET22b(+)hPK5的大肠杆菌经IPTG诱导后以可溶性形式表达16kDa的蛋白,其表达量占菌体总蛋白的30%以上,纯化后目的蛋白纯度达95%以上,Western印迹表明重组蛋白具有Histag抗原活性。构建了pET22b(+)hPK5重组质粒并成功地在大肠杆菌中获得可溶性表达,为获得大量hPK5基因工程产品奠定了实验基础。
山西省归国留学人员基金资助项目 (No .2 0 0 0 -41)
牛勃, 陈显久, 张东昌, 解军, 张悦红, 杨琦, 程牛亮. 人纤溶酶原饼环区5(hPK5)基因的分泌型表达[J]. 中国生物工程杂志, 2003, 23(9): 91-95.
https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/Y2003/V23/I9/91
Cited