重叠克隆群的研究近年来取得了迅速发展,并被进一步运用到基因组测序、基因精确定位、基因图位克隆以及基因组织结构与功能研究等方面。本文着重讨论了构建重叠克隆群的策略、一般过程,同时也对构建重叠克隆群过程中存在的问题、解决方法及发展前景进行了论述。
阿特拉津(Atrazine)又称氯乙异丙嗪[2-氯-4(乙基)-6-(异丙氨基)-1,3,5-三嗪],商品名莠去津,是一种广泛使用的三嗪类除草剂,用于阔叶杂草和禾草的防除,如玉米、高梁、甘蔗和库区杂草等。阿特拉津虽然是一种低毒除草剂,但由于它被微生物矿化的过程十分缓慢,在土壤中的半存留期长达4—57周,所以在施用过这种除草剂的土壤中以及地下水和表面水中,其浓度远远超过3ppb的最大允许值,造成对环境的污染[1]。阿特拉津在世界范围内已经使用了近40年,其在环境中的扩散引起广泛重视,因此研究这种化合物的生物降解机理十分必要。虽然自1982年以来先后在诺卡氏菌属(Nocardia)[2,3]、红球菌属(Rhodococus)[4,5]、不动杆菌属(Acinetobacter)[6]、土壤杆菌属(Agrobacterium)[7]和假单胞菌属(Pseudomonas)[1,8,9]等多个细菌属中分离到降解阿特拉津的菌株,但直到90年代中期,对这一生物降解过程所涉及到的基因、酶和中间代谢物仍知之甚少。自1995年Wacket实验室从施用过阿特拉津的土壤中分离到假单胞菌ADP菌株以后[1],阿特拉津的生物降解机理研究获得了迅速发展。此后,又从根瘤菌属(Rhizobium)[10]以及棍状杆菌属(Clavibacter)、产碱杆菌属(Alcaligens)[11]和Ralstonia等多个细菌属中分离到降解阿特拉津的细菌。本文主要对假单胞菌ADP菌株降解阿特拉津的酶学、遗传学和生物工程研究概况作简要介绍 。
1,6—二磷酸果糖(FDP)是糖酵解过程中的代谢产物,具有调节糖代谢中若干酶活性之功效,为恢复、改善细胞代谢的分子水平药物。由Harden和Young[1]于1908年首先发现并阐明了一般特性。其后,美国、德国、意大利、日本、芬兰等国的学者分别对FDP的制备和应用作了深入而富有成效的研究。[2][3][4][5]1制备方法本世纪初,各国生化学家将注意力集中在糖发酵的机制上。自Harden和Y...
哺乳动物精子在睾丸内产生之后,经历了附睾内成熟,雌性生殖道中获能以及超激活运动,最终获得了受精能力。在透明带或其他因素诱导下,发生顶体反应。1精子的成熟与获能精子的成熟与获能,均与精子头部膜的变化有关,精子从附睾头向附睾尾的运动过程中,逐步获得受精能力(Yanagimachi,1994)。附睾内精子成熟的变化主要发生在以下几个方面:1.质膜上胆固醇含量增多。2.由于吸附了附睾分泌的大量蛋白质...
碱性磷酸酶(ALP)及其同工酶的研究已越来越为人们所重视,特别是目前对肾脏疾病及肿瘤方面的研究进展迅速,作为某些疾病的标志物正为人们所认识,本文简要综述了在碱性磷酸酶同工酶的研究与应用的新进展 。
横纹肌样瘤(RT)的起源迄今仍是世界上悬而未决的重大难题。第一例RT发现于肾脏。但迄今发现的RT均难以复制成功。在纯化3代的肿瘤阴性对照猫肾和犬肾原代细胞皮下接种裸鼠的致癌/致瘤率为0%(0/32),肿瘤阳性对照Hela细胞皮下接种裸鼠产生进行性生长恶性肿瘤的比率为100%(40/40)的前提下,BHK-21细胞皮下接种裸鼠均产生进行性生长的恶性肿瘤(65/65),其中染色体众数为40±2(比率58%~68%)的KA株致RT比率为52.38%(11/21),具有两个染色体众数40±2(比率41%~53.5)和72±2(比率31%~35%)的YA株致RT的比率为83.33%(10/12),染色体众数为73±3(比率42%~50%)的成瘤细胞体外再培养NM28/YA株致RT的比率为71.43%(15/21),染色体众数为42(比率28%~30%)的M株致RT的比率为0%(0/10),致形态类似于分化比较好的平滑肌肉瘤的恶性肿瘤的比率为100%(10/10),可见BHK-21细胞不能用作病毒活疫苗培养基质,可替代Hela细胞用作恶性肿瘤阳性对照细胞。高变异率BHK-21细胞株皮下接种无胸腺裸鼠大多产生恶性RT(26/42),但要求完形活细胞接种量要大(2~9×107/鼠),肿瘤产生迅速,生长快速,血管丰富,供血充分,接种细胞后10~20天或2~3周肿瘤长径×短径均值基本达到30mm×20mm标准。其它高变异率细胞系接种丧失免疫机能的无菌实验动物,如环境条件和生长状况达到上述标准,理当可能产生恶性RT。RT在模型动物体内的首次发现和成功复制,为弄清RT的起源问题提供了机会。可见,肾上皮是恶性RT的重要起源组织,本研究开辟了RT起源研究的新阶段。克隆出致RT的高变异率BHK-21细胞株,建立RT裸鼠模型,并应用于RT的临床诊断防治或进一步探索,都具有重大意义。
分子生物学技术在植物和动物常规育种中的应用主要包括两个方面,即分子标记和基因工程。分子标记,或称DNA标记,是基因型在DNA水平上的表现形式。目前,已产生了多种分子标记技术,在方法上可以分为三类[17]:(1)非PCR类,如RFLP(Restrictionfragmentlengthpolymorphism)和VNTRs(Variablenumberoftandemrepeats)。(2)以...
本文阐述了膜技术改造老《注射用水》水站的方法,实现了去离子水进入蒸馏塔之前热源质<0.5EU/ml的设计思想,总结了几点体会。