中国生物工程杂志

本文发展了ＰＣＲ克隆和亚克隆技术制备ＤＮＡ测序模板。首先，我们用ｐＵＣ／Ｍ１３系列质粒的通用正反向引物ＰＣＲ扩增出质粒ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＫＳＤＮＡ的多克隆位点及其侧翼序列，用ＥｃｏＲＶ和ＸｈｏＩ消化成为左右两个引物多克隆臂，与粘虫核型多角体病毒（ＬｓＮＰＶ）的ＥｃｏＲＶ和ＸｈｏＩ约４００ｂｐ和５００ｂｐ片段分别连接，经ＰＣＲ扩增，得到两端具有上述正反向引物结合位点的测序模板，用ｄｄＮＴＰ链终止法／ＰＣＲ扩增／银染色，从片段两端测定了全部９１９ｂｐ序列，这种ｄｄＮＴＰ／ＰＣＲ／银染测序法简化了操作，大大缩短了测序模板的制备时间，易于实现自动化操作。