扩增酶切片段多态性(Amplified Restriction fragment polymorphism,简称AFLP)是由 Zabeau 等1992年发明的一项新的 DNA 指纹技术。它结合了 RFLP 和PCR 技术的特点,具有 RFLP 技术的可靠性和 PCR 技术高效性。其基本原理是对基因组DNA 酶切片段的选择性扩增。AFLP 扩增片段的谱带数取决于采用的内切酶及引物3’端选择碱基的种类、数目和所研究基因组的复杂性。实验所采用引物长度一般为16个碱基,具有较高的 Tm 值,能够获得可靠的实验结果,同时通过调整引物3’端选择碱基的数目可获得丰富的多态性。利用这一方法,在不需要事先知道 DNA 序列信息的情况下就可以同时进行多数 DNA 酶切片段的 PCR 扩增,典型的 AFLP 实验,一次可获得50—100条谱带。该技术为不同来源和不同复杂度基因组的分析提供了一个有力的工具。
随着基因工程药物产品的日益增多,对其进行严格的质量控制已愈显重要。本文分别就产品的鉴定以及纯度、活性、安全性、稳定性和一致性的评价这六个方面对该质控系统进行了阐述,同时还分析了目前所用的多种检测方法的特点。基因工程药物产品中残余杂质的限量分析也是本文着重探讨的内容之一。
基因枪技术是近年发展起来的一项新的植物遗传转化技术。本文较为系统地介绍了基因枪的类型,以及它们各自的特点和工作原理,并对基因枪在植物遗传转化中的广泛用途作了重点介绍。文中引用参考文献七十余篇,为进一步深入了解学科的最新研究进展提供了方便。
首先从分类地位、毒粒结构、基因组结构、基因组转录调节及复制繁殖周期等方面对人类腺病毒分子生物学进展作了概述,然后论述了人类腺病毒用作基因工程载体的特性。人类腺病毒不仅是用作研究真核基因表达调控机制的良好模型,而且是基因工程的重要载体。人类腺病毒载体除具有组建多价重组口服活疫苗的前景外,还可以作为一种表达载体获得高水平的外源蛋白,研究组织特异性表达和建立稳定的细胞系,以及在机体组织中转移表达报告基因以治疗疾病等。
本文介绍了最近几年用植物细胞培养生产花青素的研究进展,包括:光诱导的研究、细胞生长与花青素积累的关系、外加刺激剂、培养基成分(碳源、氮源、无机离子及渗透压等)、生长素种类与含量对植物细胞积累花青素的影响以及选育高产细胞系、提高花青素产率的新方法等。
我国的中药材是一个具有数千年历史的医药宝库,至今仍在中国和许多国家和地区广为使用。传统药材中,80%为野生资源,但由于盲目挖掘,不仅使野生资源日益减少,而且严重破坏了自然界的生态平衡;人工种植又面临品质退化,农药污染和种子带病等问题。而且,人工种植的药材,活性成分的种类和数量往往因地区及气候不同而异,给品质控制带来许多困难。这些问题,严重影响了我国传统药材的生产和供应, 据了解, 在400余种经常使用的药材中, 每年短缺20%左右。因此除了尽快制定政策法规保护我国不断减少的野生资源以外, 更加重要的是必须找到彻底改变这种局面的有效途径。
加州大学医学院 Teh Ping Lin 博士早在1966年即利用小鼠受精卵原核显微注射技术,系统地研究了微注射不同量外源物质（石蜡油、牛γ-球蛋白溶液）对小鼠胚胎受体移植后的分裂、发育的影响程度,并预见该技术用于研究小鼠或其它种类哺乳动物胚胎分化及遗传效应具有潜在价值。直到1980年,随着分子生物学技术的迅速发展,Gordon 等人首先采用显微注射法育成带有人胸苷激酶基因这一外源 DNA 片断的"新型"转基因小鼠后,该项技术在建立
近十多年是世界生物技术迅速发展时期。农业转基因动植物研究开发取得新进展,培育成功一批抗虫抗病、耐除草剂和高产、优质农作物新品种具有不同作用的转基因猪、羊新品种为发展高效益畜牧业带来利益。生物技术产品开发和基因治疗技术取得突破。生物技术产业化加快,下世纪初期将成为支柱产业之一。近两年,美、欧、日等发达国家政府制订了一些有利于生物技术发展的新政策和多方筹资进行生物技术基本建设。
引物是决定 PCR 结果的关键。本实验中,引物Ⅰ、Ⅱ虽有26个碱基,但由于其5’端有8个碱基为限制性内切酶的识别序列。所以实际上只有18个碱基与原始模板互补配对。采用标准的 PCR 方法时不能产生理想结果。经采用 PCR——四步两段扩增法从人胎盘cDNA 文库中分离得到—484bp 的 DNA 片段。通过斑点杂交鉴定,结果表明该 DNA 片段为 hbFGF 基因。
本文以聚合酶链式反应(PCR)对35例乙型肝炎免疫指标(HBVm)全阴性的原发性肝细胞癌(PHC)患者血清、外周血单核细胞(PBMC)、肝活检标本进行乙型肝炎病毒HBV-DNA 检测,其检出率分别为34.29%、60.00%、68.57%。说明一部分血清 HBVm 全阴性的 PHC 患者血清并非无传染性,ELISA 法具有一定的局限性。PBMC 内有相当的HBV-DNA 存在,这对于研究 PHC 患者体内 HBV 的存在情况、各型乙型肝炎患者的传染性及疗效的评价提出了新课题,具有十分重要的意义。HBVm 全阴的 PHC 患者肝细胞内 HBV-DNA 有很高的分布,二者有明显的相关关系,支持 HBV 对 PHC 有较高致病性研究。本文结果还显示 PCR 法具有较高的敏感度,对研究 HBV 对人类的感染、在患者体内的分布情况及血清传染性等都具有较高的价值。
