利用Red系统快速改构含鼠β-酪蛋白基因的细菌人工染色体

中国生物工程杂志

2005, Vol. 25

Issue (8): 45-50

论文

利用Red系统快速改构含鼠β-酪蛋白基因的细菌人工染色体

辛艳丽, 贾玉艳, 王恒梁, 邓继先

军事医学科学院生物工程研究所, 北京 100071;
2. 西北农林科技大学, 杨凌 712100

全文: PDF(566 KB) HTML

摘要：

采用Red系统介导的同源重组方法对含有鼠β-酪蛋白基因的RPCI23-440C1BAC进行快速改构。首先通过PCR方法,获得两端带有鼠β-酪蛋白基因同源序列的tPAm-Zeo同源重组片段,然后将此同源重组片段电击转化至已含有编码Red重组酶质粒的RPCI23-440C1BAC菌中,在λRed重组系统的帮助下,通过同源重组片段两端与RPCI23-440C1中β-酪蛋白同源的序列在菌体内与β-酪蛋白基因发生同源重组,将其置换。最后利用Zeocin抗性基因两侧的FRT位点,通过FLP位点专一性重组将抗性基因剔除。经Southern blot和序列分析鉴定表明,获得了重组正确且无编码两种重组酶质粒的tPAm-RPCI23-440C1BAC克隆。

关键词： 细菌人工染色体; λRed重组系统; β-酪蛋白基因; FLP

收稿日期: 2005-01-27 出版日期: 2005-08-25

基金资助:

国家“863”计划资助项目(2002AA206621)

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辛艳丽, 贾玉艳, 王恒梁, 邓继先. 利用Red系统快速改构含鼠β-酪蛋白基因的细菌人工染色体[J]. 中国生物工程杂志, 2005, 25(8): 45-50.

链接本文:

https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/Y2005/V25/I8/45

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