雄激素含量测定用蛋白微阵列的制备

中国生物工程杂志

2005, Vol. 25

Issue (11): 89-95

论文

雄激素含量测定用蛋白微阵列的制备

周勇^1,2, 王伟¹, 耿美玉², 杜冠华¹

1. 中国协和医科大学中国医学科学院药物研究所, 北京 100050;
2. 中国海洋大学海洋药物与食品研究所, 青岛 266003

^1,2

全文: PDF(604 KB) HTML

摘要：

利用分子生物学技术对鼠雄激素受体结合域(rARLBD)重组表达,结合新兴的蛋白质微阵列技术建立了一种快速无污染的检测方法,用于临床雄激素检测及新药发现。实验将编码ARLBD的cDNA片段(888bp)插入到含有多聚组氨酸标签的表达载体pET32a中构建了表达质粒pET32a/AR,并将其转化到大肠杆菌BL21中。经IPTG低温诱导,得到高效表达的可溶性ARLBD融合蛋白产物,并通过NiNTA凝胶亲和吸附纯化。将纯化得到的ARLBD使用芯片点样仪固定到硅烷化-多糖表面片基,制备得到ARLBD蛋白质微阵列。实验得到的特异性结合曲线表明在微阵列上的受体蛋白能够保持功能构像。通过Scatchard方程计算得到微阵列上ARLBD与荧光标记的睾酮结合的Kd值为5.32nmol/L。浓度依赖性标准曲线表明这一方法有较高的灵敏度,最低检测限达1pmol/L。应用这一方法对224例健康中国老年人血清雄激素水平进行了测定,研究证明了该方法的可靠性,并首次提供了一定样本量的我国老年人血清活性雄激素水平的参考值。这一技术的建立将为生物工程技术产品与临床检测和分子水平化合物筛选有效地结合提供一条新的途径。

关键词： 雄激素受体; 融合表达; 蛋白质微阵列; 血清检测

收稿日期: 2005-06-17 出版日期: 2005-11-25

基金资助:

国家“863”计划资助项目(2002AA2Z2004,2002AA2Z343B,2002BA711A0111)

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周勇, 王伟, 耿美玉, 杜冠华. 雄激素含量测定用蛋白微阵列的制备[J]. 中国生物工程杂志, 2005, 25(11): 89-95.

链接本文:

https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/Y2005/V25/I11/89

[1]	徐安健, 李艳萌, 李斯文, 乌姗娜, 张蓓, 黄坚. 人组氨酸磷酸酶蛋白PHPT1的细胞定位及其对细胞层状伪足形成的影响[J]. 中国生物工程杂志, 2017, 37(6): 17-21.
[2]	刘婧莹, 刘晨浪, 张允雷, 王世奇, 夏立秋, 张友明. 牛乳铁蛋白肽(LfcinB)在苏云金芽胞杆菌中的融合表达[J]. 中国生物工程杂志, 2016, 36(8): 23-30.
[3]	朱晓鹏, 张亚宁, 于津鹏, 李晓丹, 罗素兰, 长孙东亭. 芋螺毒素MrIA的串联表达、纯化及生物活性鉴定[J]. 中国生物工程杂志, 2016, 36(5): 81-88.
[4]	施贤卫, 张伟涛, 张小飞, 杨广宇, 冯雁. Actinosynne mamirum DSM43827溶解性多糖单加氧酶的异源表达和酶学性质表征[J]. 中国生物工程杂志, 2014, 34(7): 17-23.
[5]	汪建峰, 张嗣良, 王勇. 大肠杆菌中从头合成白藜芦醇途径的设计及优化[J]. 中国生物工程杂志, 2014, 34(2): 71-77.
[6]	赵海洋, 王泽, 黄鹏煌, 田海山, 李校堃, 杨树林. rhKGF2-EGFP的融合表达及醇脂质体的制备[J]. 中国生物工程杂志, 2014, 34(10): 22-27.
[7]	陈爱春, 彭伟, 汪生鹏. 亲和标签在重组蛋白表达与纯化中的应用[J]. 中国生物工程杂志, 2012, 32(12): 93-103.
[8]	石继红, 石珊, 白晓智, 官浩, 陶克, 胡晓龙, 刘佳琦, 胡大海. RGD重组人IL-10的克隆、表达及其拮抗纤维化的初步研究[J]. 中国生物工程杂志, 2012, 32(02): 17-23.
[9]	姚广新, 张怡轩, 胡双纲. Intein 介导的重组人AR DBD的原核可溶性表达、纯化及活性鉴定[J]. 中国生物工程杂志, 2011, 31(04): 7-11.
[10]	高华,许崇波,李元. 截短型胰高血糖素样肽-1的融合构建与表达[J]. 中国生物工程杂志, 2009, 29(08): 19-25.
[11]	阎金勇,闫云君. 微生物脂肪酶的重组表达[J]. 中国生物工程杂志, 2008, 28(5): 135-140.
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[13]	殷秀飞,廖玉华,汪家权. 人分泌型磷脂酶A2(hsPLA2-IIA)基因的克隆、表达及活性鉴定[J]. 中国生物工程杂志, 2006, 26(08): 93-97.
[14]	李健峰,肖红剑,姬秋彦,李智华,龙海亭,阎玲梅,罗娜,徐维明. 重组人甲状旁腺激素肽（1-34）在大肠杆菌中的高效融合表达及纯化[J]. 中国生物工程杂志, 2006, 26(03): 26-30.
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