CALB脂肪酶在毕赤酵母中的组成型表达及纯化

中国生物工程杂志

2009, Vol. 29

Issue (10): 55-59

研究报告

CALB脂肪酶在毕赤酵母中的组成型表达及纯化

朱艳飞,杨博^**

华南理工大学生物科学与工程学院生物技术系广州 510006

The Constitutive Expression of CALB in Pcihia pastoris and Purification of Product

ZHU Yan-fei¹,YANG Bo¹

School of Bioscience & Bioengineering,South China University of Technology,Guanzhou 510006,China

全文: PDF(496 KB) HTML

摘要：

根据南极假丝酵母脂肪酶calb的成熟多肽序列，人工合成了由毕赤酵母（Pichia pastoris)偏爱密码子组成的calb基因序列（仅成熟肽）。将该基因克隆至穿梭质粒pGAPZαΑ中，获得的重组质粒pGAPZαAcalb 经线性化后转入毕赤氏酵母GS115菌株,构建成组成型表达CALB的酵母工程菌株。酵母转化子在YPD 培养基上传代10 次后, 其外源基因未丢失。经摇瓶发酵4天后，CALB水解活力为14.5U/ml。经脱盐和阴离子交换两步纯化后，其纯度达到了95%以上，目的蛋白的含量达到了220mg/L。

关键词： lipase B from Candida antarctica (CALB); 毕赤酵母; 组成型表达; 纯化

Abstract:

The artificially synthetic gene calb(only mature peptide sequence) was inserted into a yeast constitutive vector, pGAPZαA. Under the control of the promoter GAP(glyceraldehydes 3phosphate dehydrogenase)CALB was expressed constitutively. The yeast transformants still had the foreign gene after ten times of passage in YPD medium.The activity of CALB in shake flask cultured 4 days achieved 14.5U/ml.And after two steps of purification (the desalinization and DEAE column), purity of the final protein achieved 95% and protein concentration has achieved 220mg/L.

Key words: lipase B from Candida antarctica(CALB) Pichia pastoris Constitutive expression Purification

收稿日期: 2009-05-14 出版日期: 2009-10-29

ZTFLH:

Q786

基金资助:

国家自然科学基金(20706021)、博士点基金(20070561073)、支撑计划(2006BAD27B04)资助项目

通讯作者: 杨博 E-mail: yanbo@scut.edu.cn

	服务
	把本文推荐给朋友
	加入引用管理器
	E-mail Alert
	RSS
	作者相关文章
	朱艳飞
	杨博

引用本文:

朱艳飞杨博. CALB脂肪酶在毕赤酵母中的组成型表达及纯化[J]. 中国生物工程杂志, 2009, 29(10): 55-59.

SHU Yan-Fei, YANG Bo. The Constitutive Expression of CALB in Pcihia pastoris and Purification of Product. China Biotechnology, 2009, 29(10): 55-59.

链接本文:

https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/ 或 https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/Y2009/V29/I10/55

[1]	张玲,曹小丹,杨海旭,李文蕾. 连续流层析技术在亲和层析中的应用及生产放大评估[J]. 中国生物工程杂志, 2021, 41(6): 38-44.
[2]	陈中伟,郑璞,陈鹏程,吴丹. 耐热植酸酶突变体的筛选及性质研究 ^*[J]. 中国生物工程杂志, 2021, 41(2/3): 30-37.
[3]	陈鑫洁,钱芷兰,刘启,赵清,张元兴,蔡孟浩. 毕赤酵母底盘芳香族氨基酸合成途径改造生产肉桂酸及对香豆酸^*[J]. 中国生物工程杂志, 2021, 41(10): 52-61.
[4]	石鹏程, 纪晓俊. 酵母系统表达人表皮生长因子研究进展 ^*[J]. 中国生物工程杂志, 2021, 41(1): 72-79.
[5]	吕一凡,李更东,薛楠,吕国梁,时邵辉,王春生. **LbCpf1基因的原核表达、纯化与体外切割检测 ^***[J]. 中国生物工程杂志, 2020, 40(8): 41-48.
[6]	蒋丹丹,王云龙,李玉林,张怡青. 含RGD修饰的病毒样颗粒递送ICG靶向肿瘤的研究 ^*[J]. 中国生物工程杂志, 2020, 40(7): 22-29.
[7]	谢航航,白红妹,叶超,陈永俊,袁明翠,马雁冰. 易发生聚集的重组HBcAg病毒样颗粒的纯化^*[J]. 中国生物工程杂志, 2020, 40(5): 40-47.
[8]	位薇,常保根,王英,路福平,刘夫锋. Tau蛋白核心片段306~378的异源表达、纯化及聚集特性验证^*[J]. 中国生物工程杂志, 2020, 40(5): 22-29.
[9]	刘珍珍,田大勇. 狂犬病疫苗蔗糖密度梯度离心纯化工艺开发 ^*[J]. 中国生物工程杂志, 2020, 40(4): 25-33.
[10]	朱彤彤,杨磊,刘应保,孙文秀,张修国. 辣椒疫霉PcCRN20-C蛋白的表达纯化及结晶 ^*[J]. 中国生物工程杂志, 2020, 40(1-2): 116-123.
[11]	潘炳菊,张宛怡,申会涛,刘婷婷,李中媛,罗学刚,宋亚囝. 甘露寡糖分离纯化研究进展^*[J]. 中国生物工程杂志, 2020, 40(11): 90-95.
[12]	田园,李艳玲. 基于重组毕赤酵母的fusaruside生物合成 ^*[J]. 中国生物工程杂志, 2019, 39(7): 8-14.
[13]	彭强强,刘启,徐名强,张元兴,蔡孟浩. 新型重组毕赤酵母产人胰岛素前体的表达工艺研究 ^*[J]. 中国生物工程杂志, 2019, 39(7): 48-55.
[14]	严建,贾禄强,丁健,史仲平. 甲醇周期诱导控制强化毕赤酵母生产猪α干扰素 ^*[J]. 中国生物工程杂志, 2019, 39(6): 32-40.
[15]	谢玉锋,韩雪梅,路福平. 副干酪乳杆菌β-葡糖苷酶的表达、纯化及酶学性质研究 ^*[J]. 中国生物工程杂志, 2019, 39(5): 72-79.

Viewed

Full text

Abstract

Cited

Shared

Discussed