一种小肽的多顺反子串联表达方法

中国生物工程杂志

研究报告

一种小肽的多顺反子串联表达方法

杨利军杨涛程牛亮解军张悦红牛勃

山西医科大学生物化学与分子生物学教研室山西医科大学生物化学与分子生物学教研室山西医科大学生物化学与分子生物学教研室山西医科大学生物化学与分子生物学教研室山西医科大学生物化学与分子生物学教研室山西医科大学生物化学与分子生物学教研室

A Method of Construction Polycistron Tandem Gene of Small Peptide

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摘要： 目的：构建蛇毒锯鳞蝰素(Echistatin，简写为Ecs) 多顺反子串联多拷贝基因。方法：以pMD18T-Ecs为模板，利用三对引物分别扩增Ecs基因，每个Ecs基因都有独立的起始和终止密码子，然后通过三个Ecs基因之间合适的酶切位点使之串联，再与表达载体pET30a连接后得到三拷贝重组质粒，在三个Ecs基因之间分别有SD序列和SD间隔序列。将质粒转化E.coli BL21(DE3)后IPTG诱导表达，18% SDS-PAGE和Western blot鉴定结果。结果：Ecs的表达量占全菌总蛋白的18%，实现了Ecs的串联表达。结论：Ecs多顺反子的串联表达为小分子蛋白的体外制备提供了一种全新的思路和方法。

关键词： 克隆及表达; 大肠杆菌; 蛇毒锯鳞蝰素; 多顺反子

Abstract: Objective: To construct a polycistron tandem repeated Echistatin (Ecs) gene. Methods: Three Ecs genes with independent initiation and termination codon were ligated tandem through restriction enzyme sites after amplified with 3 pairs of primers using pMD18T-Ecs as template. The polycistron Ecs gene was inserted into pET30a and expressed in E.coli BL21(DE3) with IPTG induction. The expression results were identified by 18% SDS-PAGE and Western blot. Results: The expression of Ecs polycistron was accomplished with 18% expression level of total protein determined by SDS-PAGE and Western blot. Conclusion: The successful expression of Ecs polycistron provides a new method for the preparation of low molecular weight protein.

Key words: Cloning and expression E.coli Echistatin Polycistron

收稿日期: 2006-07-11 出版日期: 2006-11-25

通讯作者: 牛勃

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杨利军,杨涛,程牛亮,解军,张悦红,牛勃. 一种小肽的多顺反子串联表达方法[J]. 中国生物工程杂志, .

. A Method of Construction Polycistron Tandem Gene of Small Peptide. China Biotechnology, .

链接本文:

https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/ 或 https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/Y2006/V26/I11/45

[1]	乔圣泰,王曼琦,徐慧妮. 番茄SlTpx原核表达蛋白的体外功能分析^*[J]. 中国生物工程杂志, 2021, 41(8): 25-32.
[2]	何若昱,林福玉,高向东,刘金毅. 信号肽在大肠杆菌分泌系统中的研究与应用进展[J]. 中国生物工程杂志, 2021, 41(5): 87-93.
[3]	吴弘轩, 杨金花, 沈培杰, 李清晨, 黄建忠, 祁峰. 利用大肠杆菌细胞工厂生产吲哚-3-乙酸的研究 ^*[J]. 中国生物工程杂志, 2021, 41(1): 12-19.
[4]	闫伟欢,黄统,洪解放,马媛媛. 丁醇在大肠杆菌中的生物合成研究进展^*[J]. 中国生物工程杂志, 2020, 40(9): 69-76.
[5]	童梅,程永庆,刘金毅,徐晨. 促进大肠杆菌周质空间小分子抗体表达的菌种构建方法^*[J]. 中国生物工程杂志, 2020, 40(5): 48-56.
[6]	杨丽,石晓宇,李文蕾,李剑,徐寒梅. 构建噬菌体展示抗体库过程中电穿孔法的条件优化[J]. 中国生物工程杂志, 2020, 40(4): 42-48.
[7]	乐易林,傅毓,倪黎,孙建中. 热稳定性丙酮酸:铁氧还蛋白氧化还原酶异源表达及其在乙酰辅酶A合成中的应用 ^*[J]. 中国生物工程杂志, 2020, 40(3): 72-78.
[8]	杭海英,刘春春,任丹丹. 流式细胞术的发展、应用及前景 ^*[J]. 中国生物工程杂志, 2019, 39(9): 68-83.
[9]	赵程程,孙长坡,常晓娇,伍松陵,林振泉. 大肠杆菌细胞裂解系统的构建及其在真菌毒素降解酶表达中的应用 ^*[J]. 中国生物工程杂志, 2019, 39(4): 69-77.
[10]	贺雪婷,张敏华,洪解放,马媛媛. 大肠杆菌丁醇耐受机制及耐受菌选育研究进展 ^*[J]. 中国生物工程杂志, 2018, 38(9): 81-87.
[11]	胡立强, 郑文, 钟艺, 杜丹, 杨浩, 龚萌. 抗病毒蛋白RC28在大肠杆菌和毕赤酵母中的表达及活性比较[J]. 中国生物工程杂志, 2017, 37(1): 14-20.
[12]	张宇萌, 童梅, 陆小冬, 米月, 莫婷, 刘金毅, 姚文兵. 大肠杆菌可溶性表达抗TNF-α Fab的工艺优化[J]. 中国生物工程杂志, 2016, 36(9): 31-37.
[13]	刘婷婷, 梁梓强, 梁士可, 郭技星, 王方海. 利用生物工程技术生产蜘蛛丝的研究进展[J]. 中国生物工程杂志, 2016, 36(5): 132-137.
[14]	张宇萌, 童梅, 陆小冬, 米月, 徐晨, 姚文兵. 提高大肠杆菌可溶性重组蛋白表达产率的研究进展[J]. 中国生物工程杂志, 2016, 36(5): 118-124.
[15]	武雪龙, 杨晓慧, 汪俊卿, 王瑞明. 蜜蜂NADPH-细胞色素P450还原酶基因在大肠杆菌中的表达及酶学特性分析[J]. 中国生物工程杂志, 2016, 36(12): 28-35.

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