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中国生物工程杂志

CHINA BIOTECHNOLOGY
中国生物工程杂志
中国生物工程杂志  2011, Vol. 31 Issue (8): 29-34    
研究报告     
胰蛋白酶抑制剂KSTI3基因新型真核表达载体的构建及其在盐藻中的表达
徐文琦, 柴晓杰, 张婷, 代靖宇, 张晓琳
大连海洋大学 海洋生物资源恢复与生境修复重点实验室 大连 116023
Construction of Trypsin Inhibitor KSTI3 Gene New Eukaryotic Expression System and Expression in Dunaliella salina
XU Wen-qi, CHAI Xiao-jie, ZHANG Ting, DAI Jing-yu, ZHANG Xiao-lin
Key Laboratory of Marine Bio-resources Restoration and Habitat Reparation in Liaoning Province,Dalian Ocean University, Dalian 116023,China
 全文: PDF(671 KB)   HTML
摘要：

应用PCR技术扩增Nos基因、 CaMV35S 启动子片段和氯霉素抗性基因 Cat ,并与胰蛋白酶抑制剂 KSTI3 基因连接,构建真核表达载体pMDCKN-Cat。DNA序列分析结果表明:表达载体中的胰蛋白酶抑制剂 KSTI3 基因、启动子 CaMV35S 、终止子 Nos 和氯霉素抗性基因 Cat 与已知序列完全一致。采用LiAc/PEG介导法将质粒pMDCKN-Cat转化至盐藻细胞中,通过氯霉素抗性基因筛选和PCR鉴定获得转基因盐藻细胞。经Western blotting检测,在硝酸纤维素膜上出现清晰的条带,分子量为20.1kDa,证明胰蛋白酶抑制剂 KSTI3 基因在盐藻中得到成功表达。
关键词： 胰蛋白酶抑制剂KSTI3基因;  盐藻;  LiAc/PEG介导法;  真核表达载体    
Abstract:

To construct cloning vector pMDNos,terminator Nos was amplified from the template pBI121 plasmid by PCR. pMDKN vector was formed by combination between pMDNos fragment and KSTI3 from plasmid pMDKSTI3 by restriction enzyme digestion. Finally,promoter CaMV35S and chloramphenicol resistance gene Cat cloned from pCAMBIA2201 were all introduced to the vector pMDKN. DNA sequencing result showed that KSTI3 gene,promoter CaMV35S ,terminator Nos and Cat gene were completely consistent with the original sequence,so new eukaryotic expression vector pMDCKN-Cat was successfully constructed. pMDCKN-Cat was transformed into Dunaliella salina ( D. salina )with LiAc/PEG method,and recombinant D. salina was selected under chloramphenicol pressure and by PCR detection. Western blotting ultimately showed that a clear strip with the molecular weight of 20.1kDa appeared on the nitrocellulose membrane,and proved that trypsin inhibitor KSTI3 was expressed in D. salina cells.
Key words: Trypsin inhibitor KSTI3 gene    Dunaliella salina    LiAc/PEG mediated method    Eukaryotic expression system
收稿日期: 2011-02-03 出版日期: 2011-08-25
ZTFLH:  Q786  
基金资助:

辽宁省教育厅资助项目(2008T023)
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引用本文:

徐文琦, 柴晓杰, 张婷, 代靖宇, 张晓琳. 胰蛋白酶抑制剂KSTI3基因新型真核表达载体的构建及其在盐藻中的表达[J]. 中国生物工程杂志, 2011, 31(8): 29-34.

XU Wen-qi, CHAI Xiao-jie, ZHANG Ting, DAI Jing-yu, ZHANG Xiao-lin. Construction of Trypsin Inhibitor KSTI3 Gene New Eukaryotic Expression System and Expression in Dunaliella salina. China Biotechnology, 2011, 31(8): 29-34.

链接本文:

https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/    或    https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/Y2011/V31/I8/29


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