植物乳杆菌ZS2058的亚油酸异构酶基因在乳酸克鲁维酵母中的克隆表达

中国生物工程杂志

2010, Vol. 30

Issue (04): 65-70

研究报告

植物乳杆菌ZS2058的亚油酸异构酶基因在乳酸克鲁维酵母中的克隆表达

朱敬华,陈海琴,张白曦,田丰伟,赵建新,陈卫,张灏^**

江南大学食品学院食品科学与技术国家重点实验室无锡 214122

Cloning and Expression of the Linoleate Isomerase Gene from Lactobacillus plantarum ZS2058 in Kluyveromyces lactis GG799

ZHU Jing-hua,CHEN Hai-qin,ZHANG Bai-xi,TIAN Feng-wei,ZHAO Jian-xin,CHEN Wei,ZHANG Hao

State Key Laboratory of Food Science and Technology, School of Food Science and Technology, Jiangnan University, Wuxi 214122, China

全文: PDF(740 KB) HTML

摘要：

目的：将植物乳杆菌ZS2058（Lactobacillus plantarum ZS2058）的亚油酸异构酶基因在乳酸克鲁维酵母（Kluyveromyces lactis）中进行克隆表达。方法：根据NCBI中已报道亚油酸异构酶（linoleate isomerase，LAI）基因的序列特征，设计引物对筛得的植物乳杆菌ZS2058进行PCR扩增，得到亚油酸异构酶全基因序列，克隆至乳酸克鲁维酵母表达载体pKLAC1，电转化得重组菌pKLAC1-LAI /Kluyveromyces lactis GG799。结果：SDS-PAGE检测，重组菌进行分泌表达获得目的蛋白，大小约为67 kDa；气相色谱（Gas Chromatogram，GC）检测到共轭亚油酸（conjugated linoleic acids，CLA）典型峰。结论：植物乳杆菌ZS2058中的亚油酸异构酶基因在乳酸克鲁维酵母中得到分泌表达，重组酶转化效率约为26%。

关键词： 共轭亚油酸; 亚油酸异构酶; 乳酸克鲁维酵母; 分泌表达; 气相检测

Abstract:

Objective: To express the Linoleate isomerase gene of Lactobacillus plantarum in Kluyveromyces lactis. Method: Linoleate isomerase （LAI）gene was amplified by PCR from chromosome of Lactobacillus plantarum ZS2058, then the gene was cloned into Kluyveromyces lactis expression vector pKLAC1, the recombinant plasmid pKLAC1-LAI was transformed into Kluyveromyces lactis GG799 by electroporation, The expression level and the activity of recombinant enzyme were detected by SDS-PAGE and Gas Chromatogram . Result: It was demonstrated that a 67 kDa protein which was equal to LAI in molecular weight was secreted in supernatant culture . The analysis of gas chromatography showed that there was a noticeable peak in the retention time of 30.304 min in recombinant broth, the peak was Conjugated Linoleic Acid. Conclusion: It showed that the linoleate isomerase gene from L.plantarum ZS2058 had been expressed and secreted by Kluyveromyces lactis GG799 . Enzyme activity experiments showed that the recombinant enzyme can converse about 26% LA into CLA.

Key words: Conjugated linoleic acids Linoleate isomerase Kluyveromyces lactis Secretory expression Gas chromatogram

收稿日期: 2009-10-12 出版日期: 2010-04-29

基金资助:

国家“863”计划（2007AA100402）、“十一五”国家科技支撑计划重点项目（2006BAD27B08）资助项目

通讯作者: 张灏 E-mail: zhanghao@jiangnan.edu.cn

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引用本文:

朱敬华陈海琴张白曦田丰伟赵建新陈卫张灏. 植物乳杆菌ZS2058的亚油酸异构酶基因在乳酸克鲁维酵母中的克隆表达[J]. 中国生物工程杂志, 2010, 30(04): 65-70.

SHU Jing-Hua, CHEN Hai-Qin, ZHANG Bai-Xi, TIAN Feng-Wei, DIAO Jian-Xin, CHEN Wei, ZHANG Hao. Cloning and Expression of the Linoleate Isomerase Gene from Lactobacillus plantarum ZS2058 in Kluyveromyces lactis GG799. China Biotechnology, 2010, 30(04): 65-70.

链接本文:

https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/ 或 https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/Y2010/V30/I04/65

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