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中国生物工程杂志

CHINA BIOTECHNOLOGY
中国生物工程杂志
中国生物工程杂志  2009, Vol. 29 Issue (10): 38-43    
研究报告     
H1亚型猪流感病毒HA基因DNA疫苗的构建及其对Balb/c小鼠的免疫效果评价
刘春国1,刘明1*,李洪涛1,2,杜金玲1,张新涛1,石薇霖1,2
1.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 兽医生物技术国家重点实验室 农业部动物流感中心及国家禽流感参考实验室 哈尔滨 150001
2.东北农业大学动物医学院 哈尔滨 150030
Construction of DNA Vaccine Expressing H1 Subtype Swine Flu Virus HA Gene and Its Immunogenicity in Balb/c Mice
LIU Chun-guo1 ,LIU Ming1,LI Hong-tao1,2,DU Jin-ling1,ZHANG Xin-tao1,SHI Wei-lin2
1.Animal Influenza Center of the Ministry of Agriculture and the National Avian Influenza Reference Laboratory, State Key Laboratory of Veterinary Biotechnology , Harbin Veterinary Research Institute of Chinese Academy of Agricultural Sciences, Harbin 150001, China
2.Northeast Agricultural University Animal Medical School, Harbin 150003, China
 全文: PDF(684 KB)   HTML
摘要：

以A/Swine/Guangdong/LM/2004(H1N1)猪流感病毒HA基因为模板，通过RT-PCR技术扩增出HA基因，并将其克隆到pCI-neo真核表达载体中，成功构建重组表达质粒pCI-HA，瞬时转染vero E6和293T细胞，通过免疫过氧化物酶单层细胞试验(Immunoperoxidase monolayer assay ，IPMA)、间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay, iIFA)和蛋白免疫印迹（Western blot，WB）实验证明，HA基因能够在哺乳动物细胞中有效表达并具有良好的生物学活性。将重组质粒三次免疫8w雌性Balb/c小鼠后，ELISA试验和中和试验结果表明该重组质粒能够诱导小鼠产生较高的抗体滴度，并具有良好的中和活性。因此为H1亚型猪流感DNA疫苗的研究奠定了理论基础。
关键词： 猪流感;  H1亚型;  HA基因;  DNA疫苗;  免疫保护    
Abstract:

The HA gene of subtype H1 swine influenza virus (SIV) A/Swine/Guangdong/LM/2004(H1N1) was amplified by RT-PCR , then it was cloned into eukaryotic expression vector pCI-neo and successfully constructed a recombinant expression plasmid pCI-HA. The pCI-HA and pCI-neo were transfected into vero E6 cells and 293T cells respectively to detect the expression of HA protein by Immunoperoxidase monolayer assay (IPMA),indirect immunofluorescence assay(iIFA) and Western blot(WB).The results showed that the HA protein expressed efficiently in vero E6 cells and 293T cells and with good biological activity. ELISA results showed that anti-H1 specific antibody response was elicited after immunizing Balb/c mice of 8 weeks old with DNA vaccine pCI-HA. This laid a foundation for H1 subtype swine influenza DNA vaccine research.
Key words: Swine influenza    H1 subtype    DNA vaccines;HA gene;immune protection
收稿日期: 2009-02-16 出版日期: 2009-10-29
ZTFLH:  Q819  
通讯作者: 刘明     E-mail: liming04@126.com
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刘春国
刘明
李洪涛
杜金玲
张新涛
石薇霖

引用本文:

刘春国 刘明 李洪涛 杜金玲 张新涛 石薇霖. H1亚型猪流感病毒HA基因DNA疫苗的构建及其对Balb/c小鼠的免疫效果评价[J]. 中国生物工程杂志, 2009, 29(10): 38-43.

LIU Chun-Guo, LIU Meng, LI Hong-Chao, DU Jin-Ling, ZHANG Xin-Chao, DAN Wei-Lin. Construction of DNA Vaccine Expressing H1 Subtype Swine Flu Virus HA Gene and Its Immunogenicity in Balb/c Mice. China Biotechnology, 2009, 29(10): 38-43.

链接本文:

https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/    或    https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/Y2009/V29/I10/38

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