重组hKGF2原核表达载体的构建及其蛋白质的纯化

研究报告

重组hKGF2原核表达载体的构建及其蛋白质的纯化

余德荣游力赵跃然王郡甫许晓群高春义

山东省医学科学院基础医学研究所山东省肿瘤免疫与基因工程重点实验室,山东省医用药物和技术重点实验室山东大学山东省立医院生殖医学研究中心山东大学山东省立医院生殖医学研究中心山东省医学科学院基础医学研究所山东省肿瘤免疫与基因工程重点实验室，山东省现代医用药物与技术重点实验室山东省医学科学院基础医学研究所山东省肿瘤免疫与基因工程重点实验室，山东省现代医用药物与技术重点实验室

Construction of recombinant prokaryotic expression vector of human KGF2 and its purification

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摘要： 角质细胞生长因子2（ keratinocyte growth factor 2, KGF2）是新近发现且发展迅速的成纤维细胞生长因子家族中新的一员，又称FGF10，是上皮细胞特异性的促有丝分裂剂，应用前景广泛。为构建其高效原核表达菌株，首先用RT-PCR法从培养的人胚胎肺成纤维细胞中获得去除信号肽的hKGF2 cDNA，将其插入pMD18-T载体；经测序后，克隆入pET-30a( + )表达载体，将成功构建的pET-30a( + )- hKGF2重组表达载体转入大肠杆菌BL21（DE3），经IPTG诱导表达后， SDS-PAGE及Western blot鉴定重组蛋白为高效可溶性表达。重组蛋白经Ni+-NTA（镍亲和层析）一步法纯化后纯度达95%以上，为进一步的应用研究及大规模生产奠定了基础。

关键词： 原核表达; 镍亲和层析; 重组hKGF2; 克隆

Abstract: Abstract: Keratinocyte growth factor 2 is a member of fibroblast growth factor family, also known as FGF10 ，Which is found recently and developed rapidly .KGF2 is a specific mitogen of epithelial cells and has a good extensive application prospect .To construct highly effective prokaryotic expressional pET-30a( + ) vector containing hKGF2 gene. The total RNA was extracted from the cultured human embryonic lung fibroblast .The hKGF2 gene absent signal peptide was amplified by using RT-PCR. Then the hKGF2 gene was inserted into pMD18-T vector .After DNA sequencing ，the hKGF2 gene was cloned into pET-30a( + ) expression vector ,then induced by IPTG . The recombinant protein was detected by SDS-PAGE and Western blot analysis. The 6×his- hKGF2 protein was successfully expressed and soluble , and the target protein amounted to 25 % of total bacteria proteins and the molecular weight is approximately 23 KD. The recombinant protein was purified by Ni+-NTA column , the purity of 6×his- hKGF2 protein reached over 95% after affinity chromatography .The one affinity column reduces the cost of production and lays a good foundation for large scale production and further exploratory development.

Key words: Clone Prokaryotic expression Ni affinity chromatography Recombinant hKGF2

收稿日期: 2006-09-29 出版日期: 2007-02-25

通讯作者: 游力

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余德荣,游力,赵跃然,王郡甫,许晓群,高春义. 重组hKGF2原核表达载体的构建及其蛋白质的纯化[J]. 中国生物工程杂志, .

. Construction of recombinant prokaryotic expression vector of human KGF2 and its purification. China Biotechnology, .

链接本文:

https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/ 或 https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/Y2007/V27/I2/9

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