大豆查尔酮合成酶(CHS)基因的克隆、表达及其在雪莲提取液中的代谢产物分析

中国生物工程杂志

研究报告

大豆查尔酮合成酶(CHS)基因的克隆、表达及其在雪莲提取液中的代谢产物分析

牛天敏马会勤陈尚武

中国农业大学食品科学与营养工程学院中国农业大学食品科学与营养工程学院中国农业大学食品科学与营养工程学院

Cloning and Expression of Chalcone Synthase(CHS) of Glycine max L and analysis of it metabolize produce in the extracts from saussurea spp

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摘要： 以中国大豆为材料，利用PCR方法克隆查尔酮合成酶（Chalcone synthase，CHS）全基因，采用SOE法克隆得到去掉内含子的查尔酮合成酶基因，核酸序列分析表明，该基因编码区长1170bp，编码390个氨基酸，与已报道的CHS的cDNA序列同源率达到97%。构建pET-GMCHS工程表达质粒，通过大肠杆菌E.coli BL21（DE3）高效表达系统表达大豆CHS。通过12% SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析表明，获得了分子量在42.9KD的一条蛋白质特异表达带。液相色谱分析大肠杆菌E.coli BL21（DE3）高效表达系统在雪莲提取液中的代谢产物，样品和空白对照样对比，样品在273nm，3.0min出现新的吸收峰，质谱分析结果表明CHS利用雪莲提取液中代谢中间产物合成了新的黄酮类物质。

关键词： 表达; 雪莲; 查尔酮合成酶; 基因克隆

Abstract: The chalcone synthase gene of Glycine max L was cloned by SOE-PCR method from the genomic DNA. The GMCHSEX was cloned into the pET- 31b in frame and expressed in E. coli. The protein was segregated by 12% SDS-PAGE gel electrophoresis after inducing by IPTG. A protein band with predicted size was detected. HPLC analysis of CHS metabolize produce in the extracts from saussurea spp, HPLC on Dikma Diamomsil Column-C18 (5μm，250×4.6mm) was employed using Vmethanol:Vwater=50:50 as the mobile phase at 1.0ml/min of flow rate. The detection wavelength was 273nm and 360nm. A new absorption peak appear at 3.0min , 273nm and there is abvious enhance of absorption peak at 9.3min, 360nm. Mass spectra proved three new flavonoid composition be synthesized.

Key words: Chalcone Synthase(CHS) pET-31b(+) gene cloning Expression E.coli Glycine max L. Merr

收稿日期: 2006-09-11 出版日期: 2007-02-25

通讯作者: 陈尚武

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牛天敏,马会勤,陈尚武. 大豆查尔酮合成酶(CHS)基因的克隆、表达及其在雪莲提取液中的代谢产物分析[J]. 中国生物工程杂志, .

. Cloning and Expression of Chalcone Synthase(CHS) of Glycine max L and analysis of it metabolize produce in the extracts from saussurea spp. China Biotechnology, .

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https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/ 或 https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/Y2007/V27/I2/58

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