慢病毒介导的RNA干涉对乳腺癌SKBR3细胞HER2受体的下调及生长抑制

中国生物工程杂志

研究报告

慢病毒介导的RNA干涉对乳腺癌SKBR3细胞HER2受体的下调及生长抑制

程联胜查昭席甲甲江冰刘兢姚雪彪

中国科学技术大学生命科学学院中国科学技术大学生命科学学院中国科学技术大学生命科学学院中国科学技术大学生命科学学院中国科学技术大学生命科学学院信阳师范学院生命科学学院

Silencing of HER2 receptor and growth inhibition of SKBR3 breast cancer cells by lentiviral-mediated RNAi

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摘要： 大约30％的乳腺癌中有表皮生长因子受体家族蛋白HER2的过表达，此类癌症的预后差，恶性程度高。RNA干涉（RNAi）是最近发展起来能特异性抑制哺乳动物细胞中基因表达的新技术。本文在以往获得的能够产生良好基因沉默效应的小干涉RNA（siRNA）的基础上，构建了U6和H1双启动子siRNA表达载体，并转染HER2高表达乳腺癌SKBR3细胞定量测定了其HER2下调效应。随后，siRNA表达盒经LR重组反应被克隆入慢病毒载体中，在成功包装成病毒后，感染SKBR3并经荧光定量PCR、蛋白印迹杂交和流式细胞仪一系列实验证明慢病毒介导的RNAi确实能有效地下调肿瘤抗原HER2的表达。细胞长期增殖实验表明经慢病毒处理后细胞生长得到抑制。我们的研究为进一步阐明HER2与癌症恶化的关系以及发展新的基因治疗药物提供了工具和可能。

关键词： 小干涉RNA; 慢病毒; 基因治疗; HER2; RNA干涉

Abstract: HER2, a member of epidermal growth factor receptor family, is overexpressed in about 30% of human breast cancer cells. Overexpression of HER2 in cancer is associated with poor prognosis, metastasis and worse survival. RNA interference (RNAi) is developed recently as a new technology which can inhibit gene expression specifically in mammalian cells. On basis of acquirement of small interference RNA (siRNA) with favorable gene silencing effect on HER2 in the previous study, a dual promoter vector composed of two different opposing polymerase III promoters, human U6 and H1 promoters, was produced for expression of siRNA. After the insertion of siRNA coding sequences between two promoters, the constructed siRNA-expressing vectors were transfected into HER2-overexpressing SKBR3 breast cancer cells and downregulation of HER2 was identified quantitatively using FACS analysis. Subsequently, the siRNA-expressing cassettes were subcloned into lentiviral vectors by LR recombination reaction. The results from infection of SKBR3 cells with siRNA-expressing lentivirus demonstrated that lentiviral-mediated RNAi could downregulate the HER2 expression efficiently by fluorescent quantitative PCR (FQ-PCR), western blot, and FACS analysis. The result of cell long-term proliferation assay demonstrated that cell growth was inhibited by lentivirus. Our study offered a new tool for clarifying the function of HER2 in cancer metastasis and a new strategy for developing the gene therapy drug.

Key words: RNAi siRNA lentivirus gene therapy HER2

收稿日期: 2006-10-24 出版日期: 2007-02-25

通讯作者: 程联胜

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程联胜,查昭,席甲甲,江冰,刘兢,姚雪彪. 慢病毒介导的RNA干涉对乳腺癌SKBR3细胞HER2受体的下调及生长抑制[J]. 中国生物工程杂志, .

. Silencing of HER2 receptor and growth inhibition of SKBR3 breast cancer cells by lentiviral-mediated RNAi. China Biotechnology, .

链接本文:

https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/ 或 https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/Y2007/V27/I2/1

[1]	赵晓煜,徐祺玲,赵晓东,安云飞. 基因治疗慢病毒载体的转导增强策略^*[J]. 中国生物工程杂志, 2021, 41(8): 52-58.
[2]	钱昱,丁晓雨,刘志强,袁增强. 基因修饰人多能干细胞的高效单克隆建系方法[J]. 中国生物工程杂志, 2021, 41(8): 33-41.
[3]	黄胜, 严启滔, 熊仕琳, 彭弈骐, 赵蕊. 基于CRISPR/Cas9-SAM系统CHD5基因过表达慢病毒载体的构建及对膀胱癌T24细胞增殖,迁移和侵袭能力的影响 ^*[J]. 中国生物工程杂志, 2020, 40(3): 1-8.
[4]	徐应永. 基因治疗产品的开发现状与挑战[J]. 中国生物工程杂志, 2020, 40(12): 95-103.
[5]	陈庆宇,王鲜忠,张姣姣. 基因技术在治疗2型糖尿病中的应用^*[J]. 中国生物工程杂志, 2020, 40(11): 73-81.
[6]	菅璐,黄映辉,梁天亚,王利敏,马洪涛,张婷,李丹阳,王明连. 利用CRISPR/Cas9技术建立敲除JAK2基因K562细胞系 ^*[J]. 中国生物工程杂志, 2019, 39(7): 39-47.
[7]	马占兵,党洁,杨继辉,霍正浩,徐广贤. 基于慢病毒系统的双荧光标记多功能自噬流监测系统建立与应用 ^*[J]. 中国生物工程杂志, 2019, 39(5): 88-95.
[8]	韩亚丽,杨冠恒,陈雁雯,龚秀丽,张敬之. 表达β-珠蛋白基因的安全性慢病毒载体的优化 ^*[J]. 中国生物工程杂志, 2018, 38(7): 50-57.
[9]	刘怡萱, 边珍, 马红梅. 癌症基因治疗技术进展与展望[J]. 中国生物工程杂志, 2016, 36(5): 106-111.
[10]	陶嫦立, 黄树林. TCR基因免疫治疗中优化转TCR基因配对的研究进展[J]. 中国生物工程杂志, 2016, 36(3): 87-92.
[11]	代玉环, 徐尧, 罗颖, 代洋, 石伟林, 徐瑶. Myocardin调控心肌H9C2细胞Ca²⁺通道机制研究[J]. 中国生物工程杂志, 2016, 36(11): 1-6.
[12]	刘瑞琪, 王玮玮, 吴勇延, 赵秋云, 王勇胜, 卿素珠. CRISPR-Cas9研究进展及在基因治疗上的应用[J]. 中国生物工程杂志, 2016, 36(10): 72-78.
[13]	朱少义, 管丽红, 林俊堂. CRISPR-Cas9系统在疾病模型中的应用[J]. 中国生物工程杂志, 2016, 36(10): 79-85.
[14]	薛金锋, 薛志刚, 陈毅瑶, 李卓, 尹彪, 邬玲仟, 梁德生. 增强型肿瘤特异性启动子介导CDTK治疗肝癌的体内外研究[J]. 中国生物工程杂志, 2015, 35(6): 1-7.
[15]	高越, 檀硕, 任兆瑞, 张敬之. 原位染色检测慢病毒载体转录通读方法的建立[J]. 中国生物工程杂志, 2015, 35(5): 55-60.

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