抗CD20嵌合抗体的表达与活性检测

师明磊, 胡显文, 陈惠鹏, 高丽华, 李世崇

中国生物工程杂志 ›› 2005, Vol. 25 ›› Issue (7) : 34-39.

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抗CD20嵌合抗体的表达与活性检测

  • 师明磊, 胡显文, 陈惠鹏, 高丽华, 李世崇
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摘要

表达了基因重组抗CD20嵌合抗体并对其生物学活性进行了初步鉴定。设计合成轻、重链可变区序列;提取血液RNA,通过RT-PCR得到人κ、IgG1的轻、重链恒定区序列。运用重叠延伸PCR,连接可变区与恒定区,将轻、重链基因连接至pIRES双表达载体。将质粒以阳离子脂质体转染CHO细胞,ELISA挑选阳性克隆,共获得7株表达较高的克隆,表达量约为2mg/L。扩大培养阳性克隆anti-CD20-1B3,收获上清,以蛋白A进行亲和层析纯化表达蛋白。SDS-PAGE检测表明纯化纯度达到95%,蛋白相对分子量与理论值吻合。以CD20+细胞Raji、Daudi、Ramous检测,表明该抗体能与CD20抗原特异性结合,体外杀伤试验说明抗体能够杀伤CD20+淋巴瘤细胞。

关键词

非霍奇金淋巴瘤 / CD20 / 单克隆抗体 / 嵌合抗体

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师明磊, 胡显文, 陈惠鹏, 高丽华, 李世崇. 抗CD20嵌合抗体的表达与活性检测[J]. 中国生物工程杂志, 2005, 25(7): 34-39

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