为了构建小鼠canstatinC端片段的原核表达载体并在大肠杆菌中表达。以小鼠肝脏组织总RNA为模板,通过RT-PCR扩增小鼠canstatinC端片段(mCan-C)基因,克隆到pMD18-T载体中并进行序列分析。将mCan-C基因定向克隆于原核表达载体pET30a(+)中,构建表达载体pET/mCan-C,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。结果表明,小鼠canstatinC端片段的cDNA长度为399bp,含有1个终止密码,编码132个氨基酸,与已知的人canstatinC端片段氨基酸的同源性为61%。IPTG诱导mCan-C在大肠杆菌E.coliBL21中表达,表达量约占菌体总蛋白量的28%,重组蛋白主要以包涵体形式存在。首次克隆了小鼠canstatinC端片段的cDNA,IPTG诱导mCan-C在大肠杆菌E.coliBL21中高效表达。小鼠canstatinC端片段的cDNA序列已收入GenBank,接受号为:AY502947。
国家自然科学基金资助项目(30270031); 河南省重大科技攻关资助项目(0122032500); 河南省杰出人才创新基金资助项目(0221001900)
侯卫红, 田芳, 王建民, 王天云, 柴玉荣, 陈华艳, 薛乐勋. 小鼠canstatin C端片段基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达[J]. 中国生物工程杂志, 2005, 25(6): 51-55.
https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/Y2005/V25/I6/51
Cited