癌基因iASPP的克隆、表达与纯化

刁世勇, 张新伟, 饶青, 邢海燕, 陈森, 王建祥, 王敏

中国生物工程杂志 ›› 2005, Vol. 25 ›› Issue (5) : 36-40.

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中国生物工程杂志 ›› 2005, Vol. 25 ›› Issue (5) : 36-40.
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癌基因iASPP的克隆、表达与纯化

  • 刁世勇, 张新伟, 饶青, 邢海燕, 陈森, 王建祥, 王敏
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摘要

iASPP是新近发现的高度保守的p53相关基因,其蛋白产物定位于细胞核内,具有结合NFκBp65亚基和p53功能,进而抑制NFκB的转录调节和p53对凋亡的调节功能。利用RTPCR方法从人白血病细胞系U937中克隆出癌基因iASPP,将其克隆至原核表达载体pET28a(+)中,成功构建iASPP表达载体PIAF,重组质粒读码框和序列与预期一致。在IPTG诱导下,重组载体大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株,表达产物经SDSPAGE和Westernblot方法分析证实系iASPP融合蛋白。利用Ni离子鳌合层析的方法纯化iASPP融合蛋白,经SDSPAGE鉴定其纯度超过80%。

关键词

p53 / 基因克隆 原核表达 / 纯化 / iASPP

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刁世勇, 张新伟, 饶青, 邢海燕, 陈森, 王建祥, 王敏. 癌基因iASPP的克隆、表达与纯化[J]. 中国生物工程杂志, 2005, 25(5): 36-40

基金

国家杰出青年基金资助项目 (3 0 0 2 5 0 19); 国家自然科学基金资助项目 (3 0 3 70 5 93 ); 天津市自然科学基金资助项目 (0 43 60 73 11)


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