Oenococcusoeni苹果酸-乳酸酶基因克隆及其在酿酒酵母中的表达

中国生物工程杂志

2005, Vol. 25

Issue (12): 50-55

论文

Oenococcusoeni苹果酸-乳酸酶基因克隆及其在酿酒酵母中的表达

刘延琳¹, 蒋思欣², 何秀萍², 李华¹, 张博润²

1. 西北农林科技大学葡萄酒学院, 杨凌 712100;
2. 中国科学院微生物研究所, 北京 100080

全文: PDF(550 KB) HTML

摘要：

苹果酸-乳酸酶是苹果酸-乳酸发酵过程中负责苹果酸转化为乳酸的功能酶。在进行酒酒球菌SD2a的苹果酸-乳酸酶基因(mleA)克隆测序基础上,以PGK1强启动子和ADH1终止子为调控元件,以大肠杆菌-酵母菌穿梭质粒YEp352为载体,构建了重组表达质粒并转化酿酒酵母YS58。酵母转化子用SD/Ura平板筛选鉴定。斑点杂交检测表明目的基因mleA转化到受体菌中,SDSPAGE检测表明获得的转化子表达了约60kDa的目标蛋白。获得的转化子在添加了L苹果酸的培养基中培养4d;取培养液上清用HPLC检测L苹果酸及L乳酸含量,采用t检验进行差异显著性分析,结果表明mleA基因进行了功能性的表达,将L苹果酸转化成L乳酸,L苹果酸和L乳酸含量分别与对照差异极显著和显著,苹果酸的相对降低率平均为20.95%。在有选择压力条件下,重组质粒相对稳定,而在无选择压力条件下,传代培养10d后大约有65%的重组质粒丢失。

关键词： 酒酒球菌; 苹果酸-乳酸酶基因; 转化; 表达

收稿日期: 2005-08-02 出版日期: 2005-12-25

基金资助:

陕西省自然科学基金;西北农林科技大学青年学术骨干支持计划资助项目

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引用本文:

刘延琳, 蒋思欣, 何秀萍, 李华, 张博润. Oenococcusoeni苹果酸-乳酸酶基因克隆及其在酿酒酵母中的表达[J]. 中国生物工程杂志, 2005, 25(12): 50-55.

链接本文:

https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/Y2005/V25/I12/50

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