Please wait a minute...

中国生物工程杂志

CHINA BIOTECHNOLOGY
中国生物工程杂志
中国生物工程杂志  2018, Vol. 38 Issue (2): 1-6    DOI: 10.13523/j.cb.20180201
研究报告     
靶向B细胞并特异结合其分泌IL-10的重组融合蛋白的构建、表达和初步鉴定 *
赵荣,陈含宇,黄春,章晓联,潘勤()
武汉大学基础医学院免疫学系 病毒学国家重点实验室 湖北省过敏及免疫相关疾病重点实验室 武汉 430071
Construction, Expression and Identification of Recombinant Fusion Protein Specifically Targeting B Cells and Binding to IL-10
Rong ZHAO,Han-yu CHEN,Chun HUANG,Xiao-lian ZHANG,Qin PAN()
School of Basic Medical Immunology, Hubei Province Key Laboratory of Allergy and Immunology,and Department of Immunology, State Key Laboratory of Virology, Medical Research Institute,Wuhan University, Wuhan 430071, China
 全文: PDF(717 KB)   HTML
摘要：

目的： CD19单链抗体可变区(single-chain fragment variable)scFv能特异性识别结合B细胞表面的CD19分子,白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)是调节性B细胞(Breg)的主要特征之一。旨在构建CD19scFv和IL-10受体1(IL-10R1)胞外段的重组融合蛋白,拟用该融合蛋白捕捉和封闭Breg细胞分泌的IL-10。方法： CD19scFv和IL-10R1胞外段克隆到pET-28a原核质粒上,E. coli BL21(DE3)工程菌表达蛋白通过镍柱富集和纯化蛋白,SDS-PAGE和Western blot对表达蛋白进行鉴定,Pull down实验验证蛋白与CD19分子和IL-10细胞因子的结合。结果： 成功表达CD19scFv-IL-10R1融合蛋白,该融合蛋白能在体外同时结合CD19和IL-10分子。 结论：CD19scFv-IL-10R1融合蛋白在体外可以同时结合CD19分子和IL-10分子,具有潜在应用前景可作为特异性抑制Breg的生物小分子。
关键词： IL-10;  调节性B细胞;  IL-10受体1;  CD19单链抗体可变区    
Abstract:

Objective： CD19 scFv (single-chain fragment variable) specifically recognizes CD19 molecule expressed on the B cells surface. Interleukin-10 (IL-10) -producing B cells are a major subset of regulatory B cells (Breg). The aim is to construct a recombinant fusion protein of CD19 scFv and IL-10 receptor1 (IL-10R1), which potentially captures and blocks IL-10 secreted by Breg cells.Methods: CD19scFv and IL-10R1 were cloned into pET-28a prokaryotic plasmid. Recombinant proteins were enriched and purified by Ni column, identified by SDS-PAGE and Western blot. Pull down analysis was performed to identify the proteins captured by CD19scFv-IL-10R1 recombinant protein.Results: The CD19 scFv-IL-10R1 fusion protein is prepared and the protein binds to both CD19 and IL-10 molecules in vitro.Conclusion: CD19scFv-IL-10R1 fusion protein binds to both CD19 molecule and IL-10 molecule in vitro, and has potential application as a specific inhibitor for Bregs.
Key words: IL-10    Regulatory B cells    IL-10R1    CD19-scFv
收稿日期: 2017-07-28 出版日期: 2018-03-21
ZTFLH:  Q819  
基金资助: * 国家自然科学基金(31771875;81471910;31370197;21572173;31770145);湖北省医学领军人才计划(523-276003);湖北省技术创新专项(2016ACA150;2016CFA062;2015CFA009);武汉市科技晨光计划 资助项目(2016070204010127)
服务　　
把本文推荐给朋友
加入引用管理器
E-mail Alert
RSS
作者相关文章　　
赵荣
陈含宇
黄春
章晓联
潘勤

引用本文:

赵荣,陈含宇,黄春,章晓联,潘勤. 靶向B细胞并特异结合其分泌IL-10的重组融合蛋白的构建、表达和初步鉴定 *[J]. 中国生物工程杂志, 2018, 38(2): 1-6.

Rong ZHAO,Han-yu CHEN,Chun HUANG,Xiao-lian ZHANG,Qin PAN. Construction, Expression and Identification of Recombinant Fusion Protein Specifically Targeting B Cells and Binding to IL-10. China Biotechnology, 2018, 38(2): 1-6.

链接本文:

https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/10.13523/j.cb.20180201    或    https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/Y2018/V38/I2/1

图1  pET-28a-CD19scFv-IL-10R1的构建
图2  CD19scFv和IL-10R1 编码基因片段PCR产物的鉴定
图3  pET-28a-CD19scFv和pET-28a-CD19scv-IL-10R1克隆双酶切琼脂糖凝胶电泳鉴定
图4  25℃诱导CD19scFv蛋白表达结果
图5  不同温度和不同IPTG浓度诱导温度下蛋白诱导表达结果
图6  CD19scFv 和CD19scFv-IL-10R1重组蛋白纯化结果SDS-PAGE和Western blot 验证
图7  CD19scfv-IL-10R1能同时结合CD19和IL-10分子
[1] Sabat R, Grutz G, Warszawska K , et al. Biology of interleukin-10. Cytokine Growth Factor Rev, 2010,21(5):331-344.
doi: 10.1016/j.cytogfr.2010.09.002
[2] Yanaba K, Bouaziz J D, Haas K M , et al. A regulatory B cell subset with a unique CD1d hi CD5 + phenotype controls T cell dependent inflammatory responses . Immunity, 2008,28(5):639-650.
doi: 10.1016/j.immuni.2008.03.017 pmid: 18482568
[3] Jurlander J, Lai C F, Tan J , et al. Characterization of interleukin-10 receptor expression on B-cell chronic lymphocytic leukemia cells. Blood, 1997,89(11):4146-4152.
doi: 10.1007/s002770050304 pmid: 9166857
[4] Carter R H, Fearon D T . CD19: lowering the threshold for antigen receptor stimulation of B lymphocytes. Science, 1992,256(5053):105-107.
doi: 10.1126/science.1373518 pmid: 1373518
[5] Yuan-Qin Min . Targeting of envelope protein E2 antigen to B cells via CD19-Scfv for HCV vaccine design. Wuhan:Wuhan University, 2013,1.
[6] Ma Y, Xiang D, Sun J , et al. Targeting of antigens to B lymphocytes via CD19 as a means for tumor vaccine development. Immunol, 2013,190(11):5588-5599.
doi: 10.4049/jimmunol.1203216 pmid: 23630363
[7] Yanaba K, Bouaziz J D, Matsushita T , et al. The development and function of regulatory B cells expressing IL-10 (B10 cells) requires antigen receptor diversity and TLR signals. Immunol, 2009,182(12):7459-7472.
doi: 10.4049/jimmunol.0900270
[8] Schlom J . Therapeutic cancer vaccines: current status and moving for-ward. Natl Cancer Inst, 2012,104(11):599-613.
doi: 10.1093/jnci/djs033 pmid: 3328421
[9] Zhang Y, Eliav Y, Shin S U , et al. B lymphocyte inhibition of anti-tumor response depends on expansion of Treg but is independent of B-cell IL-10 secretion. Cancer Immunol Immun, 2013,62(1):87-99.
doi: 10.1007/s00262-012-1313-6 pmid: 22772949
[10] Olkhanud P B, Damdinsuren B, Bodogai M , et al. Tumor evoked regulatory B cells promote breast cancer metastasis by converting resting C D 4 + T cells to T-regulatory cells . Cancer Res, 2011,71(10):3505-3515.
doi: 10.1158/0008-5472.CAN-10-4316 pmid: 3096701
[1] 林敏. 玉米生物育种基础研究与关键技术[J]. 中国生物工程杂志, 2021, 41(12): 1-3.
[2] 吴函蓉,王莹,黄英明,李冬雪,李治非,方子寒,范玲. 以基地平台为抓手,促进生物技术创新与转化[J]. 中国生物工程杂志, 2021, 41(12): 141-147.
[3] 尹泽超,王晓芳,龙艳,董振营,万向元. 玉米穗腐病抗性鉴定、遗传分析与分子机制*[J]. 中国生物工程杂志, 2021, 41(12): 103-115.
[4] 冷燕,孙康泰,刘倩倩,蒲阿庆,李翔,万向元,魏珣. 全球基因编辑作物监管趋势研究[J]. 中国生物工程杂志, 2021, 41(12): 24-29.
[5] 何伟,祝蕾,刘欣泽,安学丽,万向元. 玉米遗传转化与商业化转基因玉米开发*[J]. 中国生物工程杂志, 2021, 41(12): 13-23.
[6] 杨梦冰,江易林,祝蕾,安学丽,万向元. CRISPR/Cas植物基因组编辑技术及其在玉米中的应用*[J]. 中国生物工程杂志, 2021, 41(12): 4-12.
[7] 殷芳冰,王成,龙艳,董振营,万向元. 玉米雌穗性状遗传分析与形成机制*[J]. 中国生物工程杂志, 2021, 41(12): 30-46.
[8] 秦文萱,刘鑫,龙艳,董振营,万向元. 玉米叶夹角形成的遗传基础与分子机制解析*[J]. 中国生物工程杂志, 2021, 41(12): 74-87.
[9] 王锐璞,董振营,高悦欣,龙艳,万向元. 玉米籽粒淀粉含量遗传基础与调控机制*[J]. 中国生物工程杂志, 2021, 41(12): 47-60.
[10] 马雅杰,高悦欣,李依萍,龙艳,董振营,万向元. 玉米株高和穗位高的遗传基础与分子机制*[J]. 中国生物工程杂志, 2021, 41(12): 61-73.
[11] 王彦博,魏佳,龙艳,董振营,万向元. 玉米雄穗性状遗传结构与形成分子机制*[J]. 中国生物工程杂志, 2021, 41(12): 88-102.
[12] 毛开云,李荣,李丹丹,赵若春,范月蕾,江洪波. 全球双特异性抗体药物研发格局分析*[J]. 中国生物工程杂志, 2021, 41(11): 110-118.
[13] 吴函蓉,王莹,杨力,葛瑶,范玲. 我国生物技术基地平台现状与发展建议[J]. 中国生物工程杂志, 2021, 41(11): 119-123.
[14] 刘天义,冯卉,SALSABEELYousuf,解领丽,苗向阳. lncRNA在动物脂肪沉积中的研究进展*[J]. 中国生物工程杂志, 2021, 41(11): 82-88.
[15] 薛志勇,代红生,张显元,孙艳颖,黄志伟. 表达透明颤菌血红蛋白基因对酿酒酵母生长及细胞内氧化状态的影响*[J]. 中国生物工程杂志, 2021, 41(11): 32-39.
主管：中国科学院 　主办：中国科学院文献情报中心 　中国生物技术发展中心 　中国生物工程学会