重组杆状病毒细小VP2蛋白40L生物反应器放大工艺研究

doi:10.13523/j.cb.20171008

中国生物工程杂志

2017, Vol. 37

Issue (10): 60-64 DOI: 10.13523/j.cb.20171008

技术与方法

重组杆状病毒细小VP2蛋白40L生物反应器放大工艺研究

苏晓蕊, 李伟国, 王延辉, 高晓静, 闪伊红, 谭菲菲, 李向东, 田克恭

国家兽用药品工程研究中心洛阳 471003

Scale-up Process Optimization for Recombinant PPV-VP2 Protein Production Using Baculovirus Expression System in 40L Bioreactor

SU Xiao-rui, LI Wei-guo, WANG Yan-hui, GAO Xiao-jing, SHAN Yi-hong, TAN Fei-fei, LI Xiang-dong, TIAN Ke-gong

National Research Center for Veterinary Medicine, Luoyang 471003, China

全文: PDF(485 KB) HTML

摘要： 研究了Sf9细胞生产重组杆状病毒细小VP2蛋白在机械搅拌式生物反应器（STR）中从3L至40L的放大工艺。首先在3L反应器中，通过DO和搅拌转速的优化，使反应器中的VP2蛋白HA效价不低于摇瓶结果。在40L反应器放大时，温度、pH、DO保持不变，根据输入搅拌功率、体积溶氧系数和叶尖线速度等工程参数的计算，得到了该反应器的合理搅拌转速，最终HA效价测定结果与小罐一致。豚鼠免疫试验证实，反应器中表达的VP2蛋白制成疫苗，与HN2011灭活苗及商品化灭活疫苗相比，抗体水平上升较快且高于传统灭活苗。

关键词： 重组杆状病毒细小VP2; 生物反应器; Sf9细胞; 放大

Abstract: The focuses are on the scale-up of a Sf9 cell line to produce recombinant porcine parvovirus (PPV) VP2 protein expression using baculovirus/insect expression system from the initial 3-L bench scale to the 40-L scale. In 3L bioreactor, HA titer of VP2 protein side-by-side comparison of shake flask by optimization of DO and Agit. The operational parameters of temperature, DO, and pH for large vessels were set at the same values as those of 3-L bioreactor. Appropriately applying the calculated results to power input per volume, oxygen transfer coefficient and tip speed, resulted in successful scale-up of agitation speed for the large bioreactors. By HA titer analysis, VP2 protein had identical haemagglutinating activity comparison of 3-L. By guinea pig immunization test, It is found that recombinant VP2 subunit vaccine can be induced high level antibody reaction, and immune with recombinant VP2 subunit vaccine was faster than classical inactivated PPV vaccine.

Key words: Recombinant baculovirus PPV-VP2 Scale-up Sf9 cell STR

收稿日期: 2017-03-19 出版日期: 2017-10-25

ZTFLH:

Q819

通讯作者: 田克恭,nvctkg@126.com E-mail: nvctkg@126.com

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引用本文:

苏晓蕊, 李伟国, 王延辉, 高晓静, 闪伊红, 谭菲菲, 李向东, 田克恭. 重组杆状病毒细小VP2蛋白40L生物反应器放大工艺研究[J]. 中国生物工程杂志, 2017, 37(10): 60-64.

SU Xiao-rui, LI Wei-guo, WANG Yan-hui, GAO Xiao-jing, SHAN Yi-hong, TAN Fei-fei, LI Xiang-dong, TIAN Ke-gong. Scale-up Process Optimization for Recombinant PPV-VP2 Protein Production Using Baculovirus Expression System in 40L Bioreactor. China Biotechnology, 2017, 37(10): 60-64.

链接本文:

https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/10.13523/j.cb.20171008 或 https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/Y2017/V37/I10/60

[1]	杜毅超,吴健敏,刘金凤.猪细小病毒病毒样颗粒研究进展.动物医学进展,2016,37(7):71-75. Du Y C,Wu J M,Liu J F. Progress on porcine parvovirus virus-like particles. Progress in Veterinary Medicine,2016,37(7):71-75.
[2]	Lager K M,Mengeling W L. Porcine parvovirus associated with cutaneous lesions in piglets. J Vet Diagn Invest,1994,6(3):357-359.
[3]	Bolt D M,Waldvogel A S,Häni H,et al. Non-suppurative myocarditis in piglets associated with porcine parvovirus infection. J Comp Pathol,1997,117(2):107-118.
[4]	Kushnir N,Streatfield S J,Yusibov V. Virus-like particles as a highly efficient vaccine platform:Diver-sity of targets and production systems and advances in clinical development. Vaccine,2012,31(1):58-83.
[5]	苌生科. PPV/HN-2011毒株分子生物学特性研究及利用杆状病毒表达其VP2蛋白. 郑州:河南农业大学,2013. Chang S K. Porcine parvovirus HN-2011 molecular biological characteristics and expressed VP2 protein in insect baculovirus cell system. Zhengzhou:Henan Agricultural University,2013.
[6]	Martine Z C,Dalsgaard K,Lopezde Turiso J A,et al. Production of porcine parvovirus empty capsids with high immunogenic activity. Vaccine,1992,10(10):684-690.
[7]	Adriaan F G,Christianne J M,Palomar,et al. A novel recombinant virus-like particle vaccine for prevention of porcine parvovirus-induced reproductive failure. Vaccine,2006,24:5481-5490.
[8]	Yang J D, Lu C, Stasny B,et al. Fed-batch bioreactor process scale-up from 3-L to 2500-L scale for monoclonal antibody production from cell culture. Biotechnology and Bioengineering,2007,98(1):141-154.
[9]	Dreher T,Husemann U,Adams T,et al. Design space definition for a stirred single-use bioreactor family from 50 to 2000L scale. Eng Life Sci, 2014,14:304-310.
[10]	Agathos S N. Insect cell bioreactors. Cytotechnology,1996,20:173-189.

[1]	靳露,周航,曹云,王振守,曹荣月. 高通量灌流培养模型在生物工艺开发中的应用研究[J]. 中国生物工程杂志, 2020, 40(8): 63-73.
[2]	梁振鑫,刘芳,张玮,刘庆友,李力. 抗p185 ^erb ^B2人鼠嵌合抗体ChAb26转基因小鼠乳腺生物反应器的制备与验证 ^*[J]. 中国生物工程杂志, 2019, 39(8): 40-51.
[3]	郭玉蕾,唐亮,孙瑞强,李尤,陈依军. 高通量微型生物反应器的研究进展[J]. 中国生物工程杂志, 2018, 38(8): 69-75.
[4]	李亚芳,赵颖慧,刘赛宝,王伟,曾为俊,王金泉,陈洪岩,孟庆文. 鸡OV启动子表达HA对禽流感病毒攻击提供完全保护 ^*[J]. 中国生物工程杂志, 2018, 38(7): 67-74.
[5]	孙静静,周伟伟,周雷鸣,赵巧辉,李桂林. 杂交瘤细胞体外大规模培养研究进展[J]. 中国生物工程杂志, 2018, 38(10): 82-89.
[6]	林优红, 程霞英, 严依雯, 梁宗锁, 杨宗岐. 衣藻叶绿体表达重组蛋白及表达优化策略[J]. 中国生物工程杂志, 2017, 37(10): 118-125.
[7]	刘婷婷, 梁梓强, 梁士可, 郭技星, 王方海. 利用生物工程技术生产蜘蛛丝的研究进展[J]. 中国生物工程杂志, 2016, 36(5): 132-137.
[8]	刘爱平, 李诚, 刘书亮, 王小红, 陈福生. 抗黄曲霉毒素B1单链抗体在Sf9昆虫细胞中的表达与性质分析[J]. 中国生物工程杂志, 2016, 36(5): 40-45.
[9]	赵绘存. 基于专利信息可视化的生物反应器发展态势分析[J]. 中国生物工程杂志, 2016, 36(1): 115-121.
[10]	张丹凤, 余自青, 吴锁伟, 饶力群, 万向元. 植物生物反应器在分子医药农业中的应用[J]. 中国生物工程杂志, 2016, 36(1): 86-94.
[11]	申斓, 周爱东, 吴小芹. 植物细胞培养生物反应器的种类特点及展望[J]. 中国生物工程杂志, 2015, 35(8): 109-115.
[12]	王晓艳, 陈娜子, 艾君, 赵央, 吴美玉, 黄金枝, 姜潮, 李校堃. HBVpre-c-Fc融合蛋白在杆状病毒表达系统中的表达及其生物学活性研究[J]. 中国生物工程杂志, 2015, 35(4): 42-47.
[13]	梁振鑫, 尹富强, 刘庆友, 李力. 转基因动物乳腺生物反应器相关技术及研究进展[J]. 中国生物工程杂志, 2015, 35(2): 92-98.
[14]	张斯敏, 高越, 方彧聃, 张金脉, 张敬之. 乳腺生物反应器特异高效表达载体的构建[J]. 中国生物工程杂志, 2014, 34(7): 49-55.
[15]	林美玲, 唐寅, 张明, 易小萍, 黄明志. 重组HSV-Ⅱ病毒疫苗的微载体悬浮培养生产工艺研究[J]. 中国生物工程杂志, 2014, 34(3): 68-78.

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