利用DNA Assembly方法构建重组腺病毒载体

doi:10.13523/j.cb.2102031

中国生物工程杂志

2021, Vol. 41

Issue (6): 23-26 DOI: 10.13523/j.cb.2102031

技术与方法

利用DNA Assembly方法构建重组腺病毒载体

黄蕾,万常青,刘美琴,赵敏,郑妍鹏,彭向雷,虞结梅,付远辉(

),何金生(

)

北京交通大学生命科学与生物工程研究院北京 100044

Construction of Recombinant Adenovirus Vectors Using the DNA Assembly Method

HUANG Lei,WAN Chang-qing,LIU Mei-qin,ZHAO Min,ZHENG Yan-peng,PENG Xiang-lei,YU Jie-mei,FU Yuan-hui(

),HE Jin-sheng(

)

College of Life Sciences & Bioengineering, Beijing Jiaotong University, Beijing 100044, China

全文: PDF(961 KB) HTML

摘要：

目的:建立一种基于DNA Assembly方法的重组腺病毒载体构建方法。方法:首先,通过设计合适的酶切位点及同源臂,采用了传统的限制性内切核酸酶连接方法和DNA Assembly方法获得63型猩猩腺病毒(Chimpanzee adenovirus serotype 63,ChAd63)的骨架质粒pChAd63。随后,采用Sca I单酶切携带EGFP基因的穿梭pShuttle63/EGFP,Hpa I单酶切pChAd63,以DNA Assembly方法,获得重组腺病毒载体pChAd63/EGFP。最后,在293细胞中拯救获得重组腺病毒rChAd63/EGFP。结果:采用DNA Assembly方法成功构建了重组腺病毒载体pChAd63/EGFP,并拯救出重组腺病毒rChAd63/EGFP。结论:DNA Assembly可用于重组腺病毒载体的构建,有利于提高重组腺病毒载体的构建效率。

关键词： 重组腺病毒载体; DNA Assembly

Abstract:

Objective: To establish a recombinant adenovirus vector construction method based on the DNA Assembly method. Methods: First, by designing suitable restriction sites and homology arms, the backbone plasmid pChAd63 of Chimpanzee adenovirus serotype 63 (ChAd63) was obtained using traditional restriction endonuclease ligation methods and the DNA Assembly method. Subsequently, the shuttle plasmid pShuttle63/EGFP carrying the EGFP gene was digested with Sca I, and pChAd63 was digested with Hpa I. The recombinant adenovirus vector pChAd63/EGFP was obtained by the DNA Assembly method. Finally, the recombinant adenovirus rChAd63/EGFP was rescued in 293 cells. Results: The recombinant adenovirus pChAd63/EGFP was successfully constructed by the DNA Assembly method, and the recombinant adenovirus rChAd63/EGFP was rescued. Conclusion: The DNA Assembly method can be widely used in the construction of recombinant adenovirus vectors, and is beneficial to improveing the construction efficiency of recombinant adenovirus vectors.

Key words: Recombinant adenovirus vector DNA Assembly

收稿日期: 2021-02-24 出版日期: 2021-07-06

ZTFLH:

Q812

通讯作者: 付远辉,何金生 E-mail: yhfu@bjtu.edu.cn;jshhe@bjtu.edu.cn

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引用本文:

黄蕾,万常青,刘美琴,赵敏,郑妍鹏,彭向雷,虞结梅,付远辉,何金生. 利用DNA Assembly方法构建重组腺病毒载体[J]. 中国生物工程杂志, 2021, 41(6): 23-26.

HUANG Lei,WAN Chang-qing,LIU Mei-qin,ZHAO Min,ZHENG Yan-peng,PENG Xiang-lei,YU Jie-mei,FU Yuan-hui,HE Jin-sheng. Construction of Recombinant Adenovirus Vectors Using the DNA Assembly Method. China Biotechnology, 2021, 41(6): 23-26.

链接本文:

https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/10.13523/j.cb.2102031 或 https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/Y2021/V41/I6/23

图1 穿梭质粒pShuttle63的酶切鉴定

图2 pShuttle63/EGFP酶切鉴定

图3 pChAd63酶切鉴定

图4 pChAd63/EGFP酶切鉴定

图5 pChAd63/EGFP转染293细胞后表达的EGFP (Nikon TE2000-S,10×)

图6 pChAd63/EGFP转染293细胞及重组腺病毒在293细胞中传代

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