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中国生物工程杂志

CHINA BIOTECHNOLOGY
中国生物工程杂志  2015, Vol. 35 Issue (4): 80-85    DOI: 10.13523/j.cb.20150412
技术与方法     
一种新型高糖基化免疫融合蛋白NESP-Fc的研制
晏丽, 王康, 李瑞建, 白义, 白先宏, 周海平
百泰生物药业有限公司 北京 100176
Manufaction of a New High-glycosylated Fusion Protein NESP-Fc
YAN Li, WANG Kang, LI Rui-jian, BAI Yi, BAI Xian-hong, ZHOU Hai-ping
BioTech Pharmaceuticals Co., Ltd., Beijing 100176, China
 全文: PDF(736 KB)   HTML
摘要:

新红细胞生成刺激蛋白(NESP),是重组人红细胞生长素(rhEPO)的一种高糖基化类似物,它含有5个N端糖链和比rhEPO高2倍的唾液酸残基,具有较好的代谢稳定性和3倍于rhEPO的半衰期。在新红细胞生成刺激蛋白(NESP)的基础上,通过NESP的cDNA与人IgG2的铰链区与CH2和CH3的cDNA连接,形成了融合蛋白NESP-Fc,来达到提高NESP半衰期的目的。表达载体的构建、融合蛋白的表达纯化和初步的功能性试验等一系列研究证实,所表达的融合蛋白主要以二聚体形式存在;NESP-Fc能明显促进UT-7细胞的生长和小鼠体内网织红细胞的增殖;在大鼠体内的研究发现其半衰期高达56h;小试规模重组蛋白的表达量在1.4g/L左右。这些研究为该融合蛋白最终实现临床应用和产业化打下了良好的基础。

关键词: 贫血新红细胞生成刺激蛋白(NESP)融合蛋白CHO细胞    
Abstract:

New erythropoiesis stimulating protein (NESP), is a highly glycosylated rhEPO analogues containing five N-terminal sugar chain and twice as high in sialic acid residues than that of rhEPO. NESP has greater metabolic stability and three times the half-life of rhEPO. Fusion with Fc fragment can prolongs half-life of a protein in vivo. NESP was used to construct the new erythropoiesis stimulating protein-IgG2 Fc fragment fusion protein (NESP-Fc).After process optimization, the expression of NESP-Fc is about 1.4g/L. A series of studies confirmed that the fusion protein can form dimer, and the molecular weight of the dimer is about 130kDa. The NESP-Fc fusion protein can significantly promote the growth of UT-7 cells in vitro, and fusion with Fc didn't impact the biological function of NESP. In mouse model, NESP-Fc dose-dependently increased reticulocyte level. The half-life of NESP-Fc fusion protein can reach up to 56 hours in rats. These studies of NESP-Fc fusion protein proved that NESP-Fc could be potentially used as a medicine for anemia, and it also laid a solid foundation for future clinical trial and the final industrialization.

Key words: Anemia    New erythropoiesis stimulating protein (NESP)    Fusion protein    CHO cells
收稿日期: 2014-11-26 出版日期: 2015-04-25
ZTFLH:  Q819  
基金资助:

国家"重大新药创制"重大专项(2012ZX09401-006)、北京经济技术开发区科技创新专项资金(JSYF2011041)资助项目

通讯作者: 周海平     E-mail: haipingzhouchu@163.com
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引用本文:

晏丽, 王康, 李瑞建, 白义, 白先宏, 周海平. 一种新型高糖基化免疫融合蛋白NESP-Fc的研制[J]. 中国生物工程杂志, 2015, 35(4): 80-85.

YAN Li, WANG Kang, LI Rui-jian, BAI Yi, BAI Xian-hong, ZHOU Hai-ping. Manufaction of a New High-glycosylated Fusion Protein NESP-Fc. China Biotechnology, 2015, 35(4): 80-85.

链接本文:

https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/10.13523/j.cb.20150412        https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/Y2015/V35/I4/80


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