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中国生物工程杂志

CHINA BIOTECHNOLOGY
中国生物工程杂志
中国生物工程杂志  2010, Vol. 30 Issue (09): 19-23    DOI: Q78
研究报告     
表达H5N1亚型禽流感病毒HA基因重组腺病毒的遗传稳定性分析及滴度测定
王青1,胡建和1**,徐彦召2
1.河南科技学院动物科学学院 新乡 453003
2.中国农业科学院上海兽医研究所 上海 200241
Genetic Stability and Titer Determination of Recombinant Adenovirus Expressing HA Gene of Strain H5N1 of Avian Influenza Virus
WANG Qing1,HU Jian-he1,XU Yan-zhao2
1.Henan Institute of Science and Technology, Xinxiang 453003,China
2.Chinese Academy of Agricultural Sciences, Shanghai Veterinary Institute, Shanghai 200241,China
 全文: PDF(1151 KB)   HTML
摘要：

研究表达H5N1亚型禽流感病毒HA基因重组腺病毒pAd-H5的遗传稳定性及重组病毒的滴度测定。将重组腺病毒pAd-H5在293细胞上连续传代20次，取第5、10、15和20代的重组病毒采用PCR 方法扩增禽流感病毒HA基因，并进行基因序列测定分析；用标记为GFP的快速测定法计算出20代次时重组病毒的滴度。从各代重组病毒DNA 中均扩增出了约1 700bp的目的条带，与HA基因片段长度一致，基因序列分析表明：第5 、10 、15 代重组病毒中的HA基因序列与原始转移载体序列完全一致，第20代重组病毒插入基因有1处发生了点突变(即HA基因417位A→G)，但其编码的氨基酸未发生变化(即同义突变)，表明表达的目的蛋白抗原表位未发生变化；计算出的重组病毒滴度为108.875pfu/0.1ml。重组腺病毒pAd-H5在293细胞上连续传代20次，具有良好的遗传稳定性，重组腺病毒的病毒滴度相对较高。
关键词： H5N1亚型禽流感;  重组腺病毒;  遗传稳定性;  病毒滴度    
Abstract:

The focus is to evaluate the genetic stability and titer determination of the recombinant adenovirus (pAd-H5) expressing HA gene of H5N1 Avian Influenza virus (AIV). The recombinant adenovirus pAd-H5 had been serially passaged for 20 passages in 293 cell line. The passages of 5,10,15 and 20 were chosen to be identified by PCR and sequence; Using GFP rapid monitoring method to test the viral titer of pAd-H5, passage 20. Furthermore, the analysis supported that HA gene was amplified correctly, without any changes on the nucleotide in passages of 5, 10 and 15. While there was only one point mutation on HA gene (417 A→G) in passage 20, but this point mutation did not lead to amino acid changes (samesense mutation). The titer of pAdH5 in 293 cell line identified by GFP rapid monitoring method was 108.75pfu/0.1ml. All the results showed that the pAd-H5 has good genetic stability within 20 passages, and the titer was relativly high.
Key words: Avian Influenza virus (AIV)    Recombinant adenovirus (pAd)    Genetic stability    Titer determination
收稿日期: 2010-02-22 出版日期: 2010-08-25
基金资助:

河南省高校杰出科研人才创新工程(2006KYCX020)资助项目
通讯作者: 胡建和     E-mail: xxjianhe@yahoo.com.cn
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王青
胡建和
徐彦召

引用本文:

王青 胡建和 徐彦召. 表达H5N1亚型禽流感病毒HA基因重组腺病毒的遗传稳定性分析及滴度测定[J]. 中国生物工程杂志, 2010, 30(09): 19-23.

WANG Jing, HU Jian-He, XU Pan-Shao. Genetic Stability and Titer Determination of Recombinant Adenovirus Expressing HA Gene of Strain H5N1 of Avian Influenza Virus. China Biotechnology, 2010, 30(09): 19-23.

链接本文:

https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/Q78    或    https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/Y2010/V30/I09/19

［1］ 于康震, 付朝阳, 崔尚金, 等. 我国禽流感防制研究进展. 中国兽医学报, 2001, 21(1): 103106. Yu K Z, Fu C Y, Chui S J, et al. Chinese Journal of Veterinary Science, 2001, 21(1): 103106. 
［2］ Yu H, Shu Y, Hu S, et al. The first confirmed human case of avian influenza A (H5N1) in Mainland China. Lancet, 2006, 367 (9504) :84. 
［3］ 陈全姣, 金梅林, 陈焕春. 禽流感疫苗研究进展. 中国生物工程杂志, 2004,24(4):3438. Chen Q J, Jin M L, Chen H C. China Biotechnology, 2004,24(4):3438. 
［4］ 王海燕, 于长青, 祝之明. 供转染的截短型PDGF2α受体高滴度腺病毒的制备及作用分析. 免疫学杂志, 2002, 4(18):308311. Wan H Y, Yu C Q, Zhu Z M. Immunological Journal, 2002, 4(18):308311. 
［5］ 中国兽药典委员会. 中华人民共和国兽药典. 北京: 农业出版社, 1990. 12221251. Commission of Chinese Veterinary Pharmacopoeia. Chinese Pharmacopoeia. Beijing: China Agricultural Press, 1990.12221251. 
［6］ 王明俊. 兽医生物制品学. 北京: 中国农业出版社, 1996.8088. Wan M J. Veterinary biological products. Beijing: China Agricultural Press, 1996.8088. 
［7］ 张浩, 郭抗抗, 张彦明, 等. 共表达猪瘟病毒E0、E2基因重组鸡痘病毒的遗传稳定性. 西北农林科技大学学报(自然科学版) , 2008, 36(8) :3640. Zhang H, Guo K K, Zhang Y M, et al. Journal of Northwest A&F University(Natural Science Edition), 2008, 36(8) :3640. 
［8］ 江千里, 王健民, 温丽敏, 等. 批量快速测定法测定标志基因为GFP的重组病毒滴度. 第二军医大学学报, 2002, 23(9):10341035. Jiang Q L, Wan J M, Wen L M, et al. Academic Journal of Second Military Medical University, 2002,23(9):10341035. 
［9］ 乔传玲, 常洪涛, 于康震, 等. 共表达禽流感病毒HA和NA基因重组禽痘病毒的遗传稳定性. 微生物学报, 2004, 5(44): 686688. Qiao C L, Chang H T, Yu K Z, et al. Acta Microbiologica Sinica, 2004, 5(44): 686688. 
［10］ 贾红玲, 苏艳, 吴润. 禽流感病毒血凝素保守氨基酸对其受体结合位点的影 响. 中国预防兽医学报, 2008, 30 (7): 500504. Jia H L, Su Y, Wu R. Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine, 2008, 30 (7): 500504. 
［11］ 殷震, 刘景华. 动物病毒学. 第2版.北京: 科学出版社, 1997.708709. Yin Z, Liu J H. Animal Virology. 2nd. Beijing: Science Press, 1997.708709. 
［12］ Smiley J R, Jackwood D J. Genetic stability of the VP2 hypervariable region of four infectious bursal disease virus isolates after serial passage in specific pathogen free chicken embryos. Avian Dis, 2001, 45 (1):18. 
［13］ 冀德君, 彭大新, 刘红旗, 等. 表达H9亚型禽流感病毒HA基因重组鸡痘病毒疫苗的遗传稳定性. 中国兽医学报, 2003, 4(23): 347349. Ji D J, Peng D X, Liu H Q, et al. Chinese Journal of Preventive Medicine, 2003, 4(23): 347349. 
［14］ 李培建, 李兵仓. 一种重组腺病毒载体的扩增、纯化和病毒滴度检测方法. 中华神经医学杂志, 2002, 1(1):5255. Li PJ, Li B C. Chinese Journal of Neuromedicine, 2002, 1(1):5255. 
［15］ 周文泉, 闵志廉, 李莉, 等. 重组腺病毒Adp16的扩增及病毒滴度检测. 医学研究生学报, 2001, 1(14): 4446. Zhou W Q, Min Z L, Li L, et al. Journal of Medical Postgraduates, 2001, 1(14): 4446.
[1] 黄蕾,万常青,刘美琴,赵敏,郑妍鹏,彭向雷,虞结梅,付远辉,何金生. 利用DNA Assembly方法构建重组腺病毒载体[J]. 中国生物工程杂志, 2021, 41(6): 23-26.
[2] 周艳, 王小囡, 闫姗姗, 吴晋元, 孙茂盛, 张磊, 李鸿钧. EGFP和Lmx1A双基因共表达重组腺病毒的构建及检测[J]. 中国生物工程杂志, 2014, 34(9): 72-79.
[3] 周年, 胡宁, 龚璇, 汪长东, 廖军义, 梁熙, 黄伟. AdEasy重组腺病毒系统对Ad-HIF1α的构建和鉴定[J]. 中国生物工程杂志, 2014, 34(3): 34-40.
[4] 谢力, 王晓囡, 李杨, 严敏, 曹颖, 李鸿钧, 孙茂盛. 表达轮状病毒nsp4基因重组腺病毒的构建与免疫评价[J]. 中国生物工程杂志, 2014, 34(2): 1-6.
[5] 朱羿龙, 李昌, 郭焱, 刘存霞, 杜寿文, 王茂鹏, 金宁一. 表达HIV-1 gag重组鸡痘病毒的构建与筛选[J]. 中国生物工程杂志, 2014, 34(1): 57-63.
[6] 王晚璞, 孙茂盛, 李鸿钧, 谢天宏, 严敏, 周艳, 尹娜. 表达神经营养因子Neurturin的骨髓间充质干细胞的构建及体外活性检测[J]. 中国生物工程杂志, 2012, 32(03): 1-6.
[7] 王文举 孙茂盛 严敏 李鸿钧. Neurturin嵌合神经营养因子重组腺病毒的构建及体外活性测定[J]. 中国生物工程杂志, 2010, 30(09): 7-12.
[8] 余桂戎 张瑞 孟艳玲 王磊 高飞 郭旭 赵晶 王涛 杨安钢. 抑癌基因Fhit重组腺病毒的构建表达及其在结肠癌细胞中的生物学功能[J]. 中国生物工程杂志, 2010, 30(01): 7-11.
[9] 于永生,吴晓洁,罗晓彤,周颜荣,陈红星,邓继先. 重组腺病毒介导的人尿激酶原突变体在山羊乳汁中的表达[J]. 中国生物工程杂志, 2009, 29(02): 29-33.
[10] 许建,李世崇,陈昭烈. 逆转录病毒表达系统及其在外源蛋白高效表达中的应用[J]. 中国生物工程杂志, 2008, 28(5): 116-121.
[11] 尚智,何金生,张梅,虞结梅,陆燕燕,谢灿,唐倩,魏薇. 人呼吸道合胞病毒M蛋白非复制型重组腺病毒的构建和鉴定[J]. 中国生物工程杂志, 2008, 28(5): 6-11.
[12] 张国强,潘薇,赵亮,庞达. eIF-4E腺病毒载体构建及对乳腺癌MCF-7细胞转移能力的影响[J]. 中国生物工程杂志, 2008, 28(3): 8-12.
[13] 钱垂文, 黄立, 王一飞, 熊盛, 张美英, 李雪玲. 表达NM23-H1/NDPK-A工程菌的遗传稳定性研究[J]. 中国生物工程杂志, 2005, 25(02): 35-38.
[14] 陆华中, 薛京伦. 克服腺病毒载体介导免疫应答的新策略:关闭淋巴细胞反应[J]. 中国生物工程杂志, 2000, 20(3): 62-66.
[15] 柯为. 空间生物技术研究取得进展[J]. 中国生物工程杂志, 1994, 14(5): 17-18.
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