Please wait a minute...

中国生物工程杂志

CHINA BIOTECHNOLOGY
中国生物工程杂志
中国生物工程杂志  2010, Vol. 30 Issue (01): 12-18    
研究报告     
禽流感病毒H5N1血凝素基因和神经氨酸酶基因在大肠杆菌中的表达
邹淑梅1,于在江1,张烨1,辛丽1,陈永坤1,唐启慧2,陈禹保3,陈清轩2,舒跃龙1**
1.中国疾病控制中心病毒病预防控制所 北京 100052
2.北京标凯科技有限公司 北京 100094
3.北京中亚国瑞生物经济研究所 北京 102206
Expression of the Hemagglutinin and Neuramidinase Gene of Influenza A Virus H5N1 in E.coli
ZOU Shu-mei1,YU Zai-jiang1,ZHANG Ye1,XIN Li1,CHEN Yong-kun1,TANG Qi-hui2,CHEN Yu-bao3,CHEN Qing-xuan2,SHU Yue-long1
1. Institute for Viral Disease Control and Prevention,China National Influenza Center,Beijing 100052,China
2.Beijing Biokit Inc.,Beijing 100094,China
3.Beijing Sinogreen Institute for Bioeconomy,Beijing 102206,China
 全文: PDF(707 KB)   HTML
摘要：

目的：克隆、表达和鉴定禽流感病毒H5N1血凝素基因（hemagglutinin，HA）和神经氨酸酶基因（neuramidinase，NA）序列,为制备抗体和基因工程疫苗打下基础。方法：在成功克隆禽流感病毒H5N1全长HA、NA基因并测序的基础上，将部分基因序列克隆到表达载体pET32a（＋）上，全基因序列克隆到表达载体pGEX4T-1上，构建了重组表达质粒pET32a（＋）/HA(49~1587bp)、pET32a（＋）/NA(121~1141bp)、pGEX4T-1/HA、pGEX4T-1/NA，转化大肠杆菌BL21/rosetta，IPTG诱导表达，利用Ni2＋亲和层析柱和GSTra P4B亲和层析柱对重组蛋白进行纯化，并用Western blotting和ELISA方法检测其抗原性。结果：重组蛋白在大肠杆菌中可以高效达,SDSPAGE显示其相对分子质量与预计大小一致，蛋白纯度占总蛋白的90％以上。ELISA和Western blotting实验证实，重组蛋白具有良好的抗原性。结论:成功克隆和表达了禽流感病毒H5N1 HA、NA基因序列,为禽流感病毒H5N1诊断试剂和疫苗的开发等进一步的研究奠定了基础。
关键词： 禽流感病毒H5N1;  血凝素;  神经氨酸酶;  克隆表达    
Abstract:

Objective:To clone, express and characterize the HA（hemagglutinin） and NA（neuramidinase，NA） protein  of avian influenza virus H5N1. Methods:On the basis of successful clone the full length HA and NA gene and sequence analysis of avian influenza virus H5N1,Ligated part of the gene into pET32a（＋）.full of the gene into pGEX4T-1.An expression vector pET32a（＋）/HA(49~1587bp),pET32a（＋）/NA(121~1141bp),pGEX4T-1/HA、pGEX4T-1/NA were constructed and expressed in E.coli BL21/rosetta induced by IPTG. recombinant protein was purified through Ni2＋ and GSTrap 4B affinity chromatography column. Western blotting and ELISA were used to determine the antigenic of the recombinant protein. Results:The recombinant capsid gene can be overexpressed in E.coli. SDSPAGE showed that the gene could express product as same as I might expect. The purity of the protein is greater than 90%.ELISA and Western blotting showed that the recombinant protein has good antigenic. Conclusion:The HA and NA protein  of avian influenza virus H5N1 has been successful cloned and expressed, which could be useful for developing diagnose reagents or vaccine of H5N1.
Key words: avian influenza virus H5N1    hemagglutinin    neuramidinase    clone and express
收稿日期: 2009-11-12 出版日期: 2010-01-27
基金资助:

“十一五”国家科技支撑计划(2006BAD06A15)资助项目
通讯作者: 舒跃龙     E-mail: yshu@vip.sina.com
服务　　
把本文推荐给朋友
加入引用管理器
E-mail Alert
RSS
作者相关文章　　
邹淑梅
于在江
张烨
辛丽
陈永坤
唐启慧
陈禹保
陈清轩
舒跃龙

引用本文:

邹淑梅 于在江 张烨 辛丽 陈永坤 唐启慧 陈禹保 陈清轩 舒跃龙. 禽流感病毒H5N1血凝素基因和神经氨酸酶基因在大肠杆菌中的表达[J]. 中国生物工程杂志, 2010, 30(01): 12-18.

JU Chu-Mei, XU Zai-Jiang, ZHANG Ye, XIN Li, CHEN Yong-Kun, TANG Qi-Hui, CHEN Yu-Bao, CHEN Qing-Han, SHU Ti-Long. Expression of the Hemagglutinin and Neuramidinase Gene of Influenza A Virus H5N1 in E.coli. China Biotechnology, 2010, 30(01): 12-18.

链接本文:

https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/    或    https://manu60.magtech.com.cn/biotech/CN/Y2010/V30/I01/12

［1］ Christensen J P,Dietz,H H,Bisgaard M. Phenotypic and genotypic characters of isolates of Pasteurel la multoci da obtained from backyard poultry and from two outbreaks of avian cholera in avifauna in Denmark. Avian Pathol,1998,27 :373381. 
［2］ Berman S M, Hirsh D C. Partial Characterization of Plasmids from Pasteurel la multoci da isolated from turkeys. Antimicroblal Agents Chemotherapy,1978,14 :348352. 
［3］ Subbarao K, Klimov A, Katz J, et al . Characterization of an avian influenza A (H5N1) virus isolated from a child with a fatal respiratory illness .Science,1998,293 :393396. 
［4］ Zhou N N, Short ridge K F, Claas E C J,et al . Rapid evolution of H5N1 influenza viruses in chicken in Hongkong. J Virol, 1999,73 :33663374. ［5］ Alexander D J . A review of avian influenza in different bird speices . Veterinary Micorbiology,2000,74:313. 
［6］倪建强,张春玲,李海燕,等. 猪流感病毒核蛋白基因的原核表达及其在诊断中的初步应用. 中国预防兽医学报, 2004, 26(1) : 18  21. Ni J Q,Zhang C L,Li H Y,et al.Chinese Journal of Preventive Medicine,2004,26(1):1821. 
［7］丛彦龙,刘金华. 流感病毒血凝素在宿主特异性转变种的分子基础. 中国兽医学报, 2008, 28 (6) : 737742. Cong Y L,Liu J H.Chinese Journal of Veterinary Science,2008,28(6):737742. 
［8］ Webster R G,BeanW J,Gorman O T,et al . Evolution and ecology of influenza A viruses . Microbiol Rev,1992,56 :152179. 
［9］ Alexander D J . A review of avian influenza in different bird speices.Veterinary Micorbiology,2000,74:313. 
［10］ Pereira H G, Tumova B,Law V G. Animal influenza A virus. World Health Organization,1965,32:855860 
［11］ 费东亮,金宁一,马鸣潇,等. H5亚型禽流感病毒HA基因在重组杆状病毒中的表达及检测. 中国兽医学报,2006,26 (4) :387389. Fei D L,Jin N Y,Ma M X,et al.Chinese Journal of Veterinary Science,2006,26(4):387389. *
［12］ 施源,袁渭康,陈敏恒. 不稳定的基因工程酵母生长动力学研究. 生物工程学报, 1990, 6 (1) : 4449. Shi Y,Yuan W K,Chen M H.Chinese Journal of Biotechnology,1990,6(1):4449. 
［13］ Claas E C,Osterhaus A D,Von Beek R, et al. Human influenza H5N1 virus related to a highly pathogenic avian influenza virus. Lancet, 1998, 35 (1) : 472477. 
［14］ Colman P M,Varghese J N,Laver W G. St ructure of the catalytic and antigenic sites in influenza virus neuraminidase. Nature,1983,303 (5912) :4144. 
［15］ 宋建领,张富强,王金萍,等. H5N1 亚型禽流感病毒神经氨酸酶基因的克隆与表达.中国病毒学,2006,21(1):4346. Song J L,Zhang F Q,Wang J P,et al.Virologica Sinica,2006,21(1):4346. 
［16］ 郑其升,刘华雷,张晓勇,等. H9N2 亚型AIV HA 基因的原核表达及间接ELISA 方法的建立.中国病毒学, 2005, 20 (3) :293297. Zheng Q S,Liu H L,Zhang X Y,et al.Virologica Sinica,2005,20(3):293297. 
［17］ 南文龙，金宁一，鲁会军,等.H5N1亚型禽流感病毒血凝素Th和B细胞表位预测及抗原性分析.中国免疫学杂志，2009，7(25)：630637. Nan W L,Jin N Y,Lu H J,et al.Chinese Journal of Immunology,2009,7(25):630637. 
［18］ 钟晓琴.感染人类的禽流感病毒A ( H5N1) 研究进展.中华肺部疾病杂志，2009，2（1）6375. Zhong X Q.Chinese Journal of Lung Disease,2009,2(1):6375.
[1] 郭晓璐,龚秀芳,陈家锋,丁晨曦,胡丹,潘秀珍,王长军. 2型猪链球菌磷酸甘油酸激酶基因的克隆表达及酶活性测定 *[J]. 中国生物工程杂志, 2018, 38(3): 16-23.
[2] 高婷婷, 张琦, 魏云林, 季秀玲, 林连兵. 栖热菌噬菌体TSP4 dCTP脱氨酶基因的克隆表达[J]. 中国生物工程杂志, 2013, 33(4): 34-39.
[3] 姚晶, 任婧, 吴正钧, 孙克杰, 郭本恒. 唾液酸化路易斯-X合成关键酶基因的克隆表达[J]. 中国生物工程杂志, 2011, 31(12): 51-56.
[4] 叶若松, 黎鹏, 章昭琳, 万翠香, 崔佳, 魏华. 两歧双歧杆菌中serpin基因的克隆、表达与功能分析[J]. 中国生物工程杂志, 2011, 31(02): 38-42.
[5] 黄劲松, 黄捷勤, 唐启慧, 陈禹保. 肺炎支原体P1蛋白羧基端基因片段在大肠杆菌中的表达及应用研究[J]. 中国生物工程杂志, 2010, 30(11): 65-69.
[6] 卢秀萍 陈学军 刘勇 唐启慧 陈禹保 李文正. 烟草富含甘氨酸RNA结合蛋白在大肠杆菌中的表达[J]. 中国生物工程杂志, 2010, 30(08): 27-30.
[7] 张烨 于在江 唐启慧 陈禹保 辛丽 陈永坤 陈清轩 舒跃龙. 禽流感病毒H9N2血凝素基因和神经氨酸酶因在真核酵母菌中的表达[J]. 中国生物工程杂志, 2010, 30(07): 0-0.
[8] 杨慧宇 边云飞 杨志明 张娜娜 肖传实. LOX-1特异性小发夹RNA 表达载体的构建及其对巨噬细胞源性泡沫细胞形成的影响[J]. 中国生物工程杂志, 2009, 29(10): 6-11.
[9] 杨令芝,李楚芳,林佐贤,孙彩军,陈凌. 流感病毒神经氨酸酶的表达及其在药物筛选中的应用[J]. 中国生物工程杂志, 2009, 29(05): 6-10.
[10] 张立娜,贾竞波. 不同基因型新城疫病毒HN基因保守区域的克隆表达及免疫活性的比较[J]. 中国生物工程杂志, 2008, 28(5): 93-98.
[11] 张洋,刘春平,李元. Cloning and Expression of EGFR Tyrosine Kinase and Construction of the Screening Model for the Enzymatic Inhibitors[J]. 中国生物工程杂志, 2008, 28(10): 12-17.
[12] 郭连宏,齐小强,姜蓉,姚晨,李元. 大鼠α-酰胺化酶(α-AE)在大肠杆菌中的表达、纯化及活性研究[J]. 中国生物工程杂志, 2007, 27(11): 6-10.
[13] 王伟利,周宇,赵丽,刘明,钱爱东. 鸽源H5N1亚型禽流感病毒株的HA和NA基因特征性分析[J]. 中国生物工程杂志, 2006, 26(05): 17-21.
[14] 刘华雷, 何海蓉, 周斌, 魏建超, 陈溥言. 禽流感病毒A/Chicken/Jiangsu/JS-1/2002(H9N2)分子鉴定与起源分析[J]. 中国生物工程杂志, 2005, 25(S1): 273-277.
[15] 王莉, 常忠义, 李平作. 转谷氨酰胺酶基因在大肠杆菌中的克隆表达[J]. 中国生物工程杂志, 2004, 24(11): 55-59.
主管：中国科学院 　主办：中国科学院文献情报中心 　中国生物技术发展中心 　中国生物工程学会